[发明专利]一种免抽提的核酸检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种免抽提的核酸检测方法及试剂盒。检测方法包括以下步骤：(1)将含有待检测核酸的生物样本放在多功能缓冲液中进行裂解，释放出待检测核酸；(2)将含有释放的待检测核酸的多功能缓冲液加入检测试剂进行待检测核酸的复制反应；(3)反应完成后根据检测结果判断样本中是否含有待检测核酸。所述的多功能缓冲液具有裂解失活生物样本，促进待检测核酸释放，以及作为待检测核酸复制和检测过程所需缓冲液的作用；所述的检测试剂包含待检测核酸复制扩增和检测核酸复制扩增产物所需要的各种酶、引物、以及辅助因子。该方法可以实现快速简便、高特异性、高灵敏度的检测病毒、细菌、细胞、生物组织等原始样本是否存在特定的核酸序列。

技术领域

本发明属于核酸抽提和检测技术领域，具体涉及一种免抽提的核酸检测方法及试剂盒。

背景技术

在现有的生物技术中对生物核酸的扩增和检测方法最主要的有PCR(聚合酶链式扩增反应)、LAMP(环介导等温扩增技术)、RPA(重组酶聚合酶扩增技术)、HDA(解旋酶DNA扩增技术)、RCA(滚环扩增技术)、CPA(交叉引物恒温扩增技术)等。PCR方法采用指数式扩增，具有灵敏度高的优点，但是同是依赖较大型的温控仪器，样本往往需要抽提成较高纯度的核酸，并且需要在专业的实验室内进行。LAMP环介导等温扩增技术不需要复杂的温控仪器，但是检测的灵敏度有限，同时需要的引物也复杂。RPA重组酶聚合酶扩增技术灵敏度很高，也不需要复杂的温控仪器，但是检测的特异性不高。其它的几种技术有些需要复杂的温控仪器，有些在检测灵敏度或特异性上不尽如人意，并且大部分都需要对样本进行处理提取核酸。本发明提供了一种不需要复杂的升温降温的温控仪器的高灵敏度高特异性的免抽提的核酸复制扩增和检测方法及试剂盒。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种免抽提的核酸检测方法。该方法可以实现快速简便、高特异性、高灵敏度的检测病毒、细菌、细胞、生物组织等原始样本是否存在特定的核酸序列。

本发明的免抽提的核酸检测方法，具体包括以下步骤：

(1)将含有待检测核酸的生物样本放在多功能缓冲液中进行裂解，释放出待检测核酸；

(2)将含有释放的待检测核酸的多功能缓冲液加入检测试剂进行待检测核酸的复制反应；

(3)反应完成后根据检测结果判断样本中是否含有待检测核酸。

所述的含有待检测核酸的生物样本包括：病毒、细菌、细胞、生物组织中的一种或多种；

所述的多功能缓冲液具有裂解失活生物样本，促进待检测核酸释放，以及作为待检测核酸复制和检测过程所需缓冲液的作用；

所述的检测试剂包含待检测核酸复制扩增所需要的各种酶、引物、以及辅助因子；或者还含有用于待检测核酸复制扩增产物检测所需要的各种辅助因子。

上述的检测方法，每100μL检测体系中含有以下含量成分的多功能缓冲液：1uM-500mM pH8.0的Tris-HCl，0.1％-15％曲拉通X-100，0.1％-20％Tween20，1mM-1M甜菜碱，1ng/mL-10mg/mL BSA，0.01％-10％SDS,0.01％-10％乙醇，1uM-5M氯化钠，1uM-5M氯化钾，1uM-1M氢氧化钠，7pM-350mM莎梵婷。

优选包含：100uM-100mM pH8.0的Tris-HCl，1％-10％曲拉通X-100，1％-10％Tween20，10mM-500mM甜菜碱，10ng/mL-1mg/mL BSA，0.05％-5％SDS,0.05％-5％乙醇，10uM-1M氯化钠，10uM-1M氯化钾，10uM-100mM氢氧化钠，20pM-100mM莎梵婷；