[发明专利]一种果实低酸调控基因MdMYB44及其应用

权利要求书

1.一种果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：通过克隆基因MdMYB44，构建MdMYB44过表达载体转化番茄，并异源过表达转化番茄，获得酸含量显著降低的转基因低酸性状番茄的应用，所述MdMYB44基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述MdMYB44基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：克隆所述基因MdMYB44的正向引物为：ATGGCTTCCACAAAGAAGGTG，反向引物为：CTACTCGATTCTACTAATCCCG。

3.根据权利要求1所述的果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：所述基因MdMYB44通过BSA-seq方法对苹果果实酸度性状进行QTL定位获得，具体过程为：选择具有极端表型差异的亲本构建分离群体，构建高酸和低酸的表型DNA混合池，进行测序分析获得。

4.根据权利要求1所述的果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：所述MdMYB44过表达载体构建的具体步骤为：

(1)目的片段的获得，根据基因的序列设计特异引物，并在引物两端加入酶切位点，以克隆载体为模板，进行PCR扩增反应，获得带有酶切位点的MdMYB44编码区扩增产物，即目的片段；

(2)目的片段的回收，将步骤(1)中带酶切位点的MdMYB44基因PCR产物片段和载体pMDC83酶切，并分别回收酶切产物，然后将回收的MdMYB44基因PCR产物片段和载体pMDC83进行连接；

(3)将步骤(1)中的目的片段连接到过表达载体PMDC83；

(4)将步骤(3)的连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，菌落PCR鉴定阳性重组子；

(5)将步骤(4)构建好的表达载体转化农杆菌感受态EHA105，获得的工程菌EHA105/PMDC83-MdMYB44用于转化苹果愈伤组织。

5.根据权利要求4所述的果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：所述步骤(1)中的克隆载体为pEASY-blunt，酶切位点为Pac1和Asc1。

6.根据权利要求1所述的果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：将所述过表达载体和干扰载体转化苹果愈伤组织和注射苹果果实，表明MdMYB44基因在过表达MdMYB44的转基因愈伤和瞬转果实中的苹果酸含量显著低于转化空载体pMDC83。

7.根据权利要求1所述的果实低酸调控基因MdMYB44的应用，其特征在于：所述基因MdMYB44通过负向调控Ma1、Ma10、MdVHA-A3、MdVHA-D2的启动子活性来抑制苹果酸的转运，产生低酸性状。