[发明专利]基因工程菌及其制备9α,22-二羟基-23,24-双降胆甾-4-烯-3-酮的应用

权利要求书

1.一种分枝杆菌(Mycobacterium)基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是将分枝杆菌中的3个3-甾酮-∆¹-脱氢酶的基因kstd 1、kstd 2和kstd 3的表达量降低、失活或敲除，同时过表达编码乙酰辅酶A乙酰转移酶/硫解酶和DNA结合蛋白的基因构建获得；其中，所述分枝杆菌的出发菌是能将植物甾醇全部代谢为二氧化碳和水的分枝杆菌，所述乙酰辅酶A乙酰转移酶/硫解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述DNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.如权利要求1所述的分枝杆菌基因工程菌，其特征在于，其出发菌是菌种号为ATCC700084的Mycobacterium smegmatis mc²155。

3.如权利要求1所述的分枝杆菌基因工程菌，其特征在于，所述的3个3-甾酮-∆¹-脱氢酶的编码基因kstd 1、kstd 2和kstd 3的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3所示。

4.如权利要求1至3任一项所述的分枝杆菌基因工程菌在制备9α，22-二羟基-23，24-双降胆甾-4-烯-3-酮中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，利用所述的基因工程菌，以甾醇为发酵原料进行发酵以生产9α，22-二羟基-23，24-双降胆甾-4-烯-3-酮。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述发酵是在25-45℃下进行。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述发酵是在25-37℃下进行发酵。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，发酵时的pH为7-8。