[发明专利]一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：将重组表达的艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的酵母发酵上清液经过超滤浓缩后，依次过离子柱、疏水柱和离子柱进行纯化，最后过分子筛进行除盐；所述离子柱至少为一个强阴离子柱和/或一个弱碱性阴离子柱，在两个离子柱之间用疏水柱进行一次纯化。

2.根据权利要求1所述的一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法，其特征在于，所述重组表达的艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的酵母发酵上清液经过超滤浓缩后，依次过SP Sepharose XL离子柱、Butyl Sepharose 4FF疏水柱、DEAE Sepharose FF离子柱进行纯化，随后过Sephacryl HR S-200分子筛进行除盐。

3.根据权利要求2所述的一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法，其特征在于，所述SP Sepharose XL离子柱纯化步骤包括：

1)超滤与样本处理

重组表达的艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的酵母发酵上清液进行超滤浓缩，得到浓缩样本，加稀释液，使电导率为2～5s/cm，随后加醋酸钠至终浓度为10-40mM，调节pH值至4.9±0.5；

2)装柱与柱处理

按照每升发酵液装柱10～20mL SP Sepharose XL树脂，水洗3～5个柱体积，再用NaOH清洗2-5个柱体积，随后水洗至pH小于9；

3)柱平衡

用平衡缓冲液平衡柱至电导率和pH与平衡缓冲液a一致；

4)上样

处理好的发酵液加载到平衡好的SP Sepharose XL离子柱中；

5)洗涤

用平衡缓冲液a清洗柱3～5个柱体积；

6)洗脱

用洗脱缓冲液a洗脱目的蛋白，收集洗脱峰。

4.根据权利要求3所述的一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法，其特征在于，所述平衡缓冲液a为：5mM辛酸钠、5mM EDTA、20mM NaAC，pH为4.0-5.5，电导率小于5ms/cm；所述洗脱缓冲液a为：5mM辛酸钠、5mM EDTA、20mM NaAC、400mM NaCl，pH为4.0-5.5。

5.根据权利要求2所述的一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法，其特征在于，所述Butyl Sepharose 4FF疏水柱纯化步骤包括：

1)装柱及柱处理

按照每毫升树脂吸附10-20mg蛋白样品装填Butyl Sepharose 4FF疏水柱，去乙醇，再用NaOH清洗2-5个柱体积，去碱；

2)样品处理

将SP Sepharose XL离子柱纯化后得到的艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白样品加NaCl至终浓度2-3M，调pH至4.0-7.0，电导率大于150ms/cm；

3)上样

将上述步骤2)处理好的样品上柱，线性流速小于150cm/h；

4)洗涤

上样完成后，用平衡缓冲液b清洗3～5个柱体积；

5)洗脱

用洗脱缓冲液b洗脱目标蛋白，收集洗脱峰。

6.根据权利要求5所述的一种艾塞那肽人血清白蛋白融合蛋白的纯化方法，其特征在于，所述平衡缓冲液b为：20mM pH 6.5～7.5的PB、5mM辛酸钠，电导小于5ms/cm；所述洗脱缓冲液b为20mM PB、5mM辛酸钠、200mM氯化钠，pH 6.5～6.8。