[发明专利]副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用。所述疫苗包含融合蛋白以及医药学上可接受的载剂，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:2所示序列。本发明提供的所述疫苗无任何毒性，安全性高，免疫原性好，能够在鸡体内产生较强的体液免疫，免疫后的鸡能够抵御强毒攻毒，并且还可以使用生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，具有质控容易、批次间稳定、生产成本低等优点。

技术领域

本发明涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，属于动物免疫药物技术领域。

背景技术

鸡传染性鼻炎（Infectious Coryza，IC）是由副鸡禽杆菌（Avibacteriumparagallinarum，Apg）引起的一种急性鸡上呼吸道传染病。该病发生后可引起蛋鸡产蛋量下降、育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加、肉鸡肉质下降等问题；剖检后以鼻腔和窦粘膜呈现急性卡他性炎症，呼吸道粘膜充血、发红和肿胀为主要特征。Apg可感染任何年龄段鸡群，4周龄以上的育成鸡和产蛋鸡的敏感性较高。病鸡与隐形带菌鸡是主要的传染源，Apg通过消化道排泄物、呼吸道、大气、尘埃和饲料等传播，后期容易和其他病原体混合感染，造成鸡群死亡率很高。目前IC在世界许多地方发生和流行，给养鸡业造成巨大经济损失。

Apg原名副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum，Hpg），属于巴氏杆菌科禽杆菌属，是一种革兰氏阴性的细小杆菌，长1-3µm，宽0.4-0.8µm，两极浓染、没有运动性、不形成芽孢，毒力菌株往往具有荚膜，但这种能力在体外传代时容易丧失。根据血凝抑制试验的分型方法，Apg分为A型、B型和C型三个血清型，目前的研究结果表明A、C两型Apg均具有不同程度的致病力，而B型致病力因菌株而异。人工感染任一型的Apg后可对其它两型感染产生一定程度的抵抗力，但三者的灭活菌体不存在型间交叉免疫，A型存在型内的交叉免疫，B型存在株间抗原多样性和部分交叉免疫。血凝素（Haemagglutinin，HA）是Apg的主要抗原成分之一，也是Apg分型的基础，在细菌定植过程中起关键作用。HA作为Apg的一种保护性抗原，不同血清型的Apg菌株的HA基因的同源性在95％以上，可与Apg的阳性血清发生反应，因此HA 也是研究Apg基因工程亚单位疫苗的最适合抗原成分。菌毛是革兰阴性菌菌体表面密布的细而短的丝状物，由结构蛋白亚单位菌毛蛋白（pilin）组成，具有抗原性。在巴氏杆菌科的其他菌属中，菌毛作为细菌表面的一种常在结构，在细菌与细胞作用、DNA的摄取和转移以及生物被膜的形成中都发挥了重要的作用。

定期进行免疫接种是我国和世界许多国家预防IC的重要手段，目前国际上普遍使用的多为灭活疫苗，大多只包含A型和C型血清型，但Apg的三个血清型之间不具有交叉保护力，导致灭活疫苗不能起到全面地保护作用，而且Apg还含有LPS等毒素物质，大量接种会带毒副作用，从而影响鸡的产蛋和生长。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种融合蛋白，其具有SEQ ID NO:2所示序列或者与SEQ IDNO:2的全长序列95％以上相同的序列。

即，本发明实施例提供的所述融合蛋白的氨基酸序列可以是原始序列，增加或截短的序列。

本发明实施例还提供了用于编码所述融合蛋白的基因。

在一些实施方式中，所述的基因具有SEQ ID NO:1所示序列或者与SEQ ID NO:1的全长序列95％以上相同的序列。

本发明实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体。

在一些实施方式中，所述重组载体包括但不限于pFastBac 1、pVL1393、pFastBacDual等，例如可以优选采用pFastBac 1。