[发明专利]一种利用体外发酵技术筛选合生元组合的方法

说明书

本发明公开一种利用体外发酵技术筛选合生元组合的方法，其包括如下步骤：(1)益生菌的活化培养：用MRS液体培养基活化和培养益生菌作为发酵菌源；(2)含益生元培养基的配制：在去除碳源的MRS液体培养基中加入选择的益生元作为发酵底物；(3)体外发酵培养：取步骤(1)所述的发酵菌源和步骤(2)所述的发酵底物混合，用CO₂气体饱和后加入10ml西林瓶中，然后置于37℃恒温水浴培养箱中发酵培养24h；(4)指标测定：体外发酵结束后，测定pH值、产气量、游离氨(NH₃‑N)浓度、挥发性脂肪酸(VFA)浓度和OD值；(5)对步骤(4)所述测定指标进行统计分析，根据分析结果对合生元组合进行筛选。

技术领域

本发明属于微生物添加剂技术领域，具体涉及一种利用体外发酵技术筛选合生元组合的方法。

背景技术

猪肉是我国目前最重要的肉食品，培育健康优质的仔猪是猪肉供应的重要保障。仔猪在断奶时，容易出现食欲下降、消化系统紊乱及腹泻的情况，造成大量死亡给养猪业带来严重的经济损失。在中国控制仔猪腹泻最普遍和有效的方法是利用抗生素作为饲料添加剂进行预防，但是抗生素的使用不仅能引起微生态失调，影响仔猪健康，长期大量使用还会使大部分菌群转为耐药性菌群，并且使用抗生素还会导致药物残留严重威胁着食品安全和人类健康。

合生元作为一种优质、高效、无害、无残留的绿色饲料添加剂成为替代抗生素的理想之选。合生元能有效减轻仔猪的腹泻率和死亡率，提高仔猪的增长率和消化率，并增强免疫机能，已在仔猪生产中开展应用研究。合生元是由益生菌和益生元组合而成，益生菌是额外补充的活性微生物，能改善肠道菌群的平衡，对宿主的健康产生有益影响，如丁酸梭菌、乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌等。益生元是一种选择性的发酵营养物质，可以改变胃肠道中一些特定微生物的组成和活性，进而改善宿主的健康和福利，如寡糖等。合生元由益生菌与益生元二者组合而成，能够发挥益生菌与益生元的双重作用。如果为益生菌选择合适的益生元作为发酵底物，就能够增强益生菌的定植或者活性以获得两种物质的协同作用，能够达到一加一大于二的效果。如果为益生菌选择的益生元不甚合适，益生菌就不能发挥其作用达不到其应有效果。因此，如何为益生菌选择合适的益生元是筛选高效合生元的关键。

发明内容

本发明的目的送提供一种利用体外发酵技术筛选合生元组合的方法，其能够简单、高效的进行合生元组合的筛选。

一种利用体外发酵技术筛选合生元组合的方法，包括如下步骤：

(1)益生菌的活化培养：用MRS液体培养基活化和培养益生菌作为发酵菌源。

(2)含益生元培养基的配制：在去除碳源的MRS液体培养基中加入选择的益生元作为发酵底物。

(3)体外发酵培养：取步骤(1)所述的发酵菌源和步骤(2)所述的发酵底物混合后加入10ml西林瓶中，然后用CO₂气体填充西林瓶以保持厌氧环境，盖上瓶盖后置于37℃恒温水浴培养箱中发酵培养24h。

(4)指标测定：体外发酵结束后，测定pH值、产气量、游离氨(NH₃-N)浓度、挥发性脂肪酸(VFA)浓度和OD值。

(5)对步骤(4)所述测定指标进行统计分析，根据分析结果对合生元组合进行筛选。

其中，步骤(1)所述益生菌为丁酸梭菌或屎肠球菌或乳酸杆菌；步骤(2)所述益生元为果寡糖或甘露寡糖或葡萄糖或魔芋葡甘聚糖，添加浓度为10g/L；步骤(3)所述发酵菌源和发酵底物的取用体积分别为500μl和5ml。