[发明专利]检测鉴别山羊痘病毒属病毒的试剂盒及使用方法

说明书

本发明涉及一种病毒检测试剂盒及其使用方法，特别是一种用于检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒，绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒)的试剂盒及用于非疾病诊断目的的使用方法。本发明的检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒)的试剂盒内包括序列为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的特异性引物。本发明具有高特异性和高灵敏度；其性价比高，只需一对特异性引物，即可对任何扩增子上的未知突变进行筛查，相比Taq‑man探针法而言，成本大大降低，操作简便。

技术领域

本发明涉及一种病毒检测试剂盒及其使用方法，特别是一种用于检测鉴别 山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒，绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒)的试剂 盒及使用方法。

背景技术

山羊痘病毒属病毒（Capripoxvirus,CPV）属于痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科（Chordopoxvirinae），包括山羊痘病毒（Goatpox Virus,GTPV）、绵羊痘病毒（SheeppoxVirus,SPPV）和牛结节性皮肤病病毒（Lumpy Skin Disease Virus,LSDV）三个成员。山羊痘病毒属病毒成员可引起牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease)、山羊痘(Goatpox)和绵羊痘(Sheeppox)等动物疫病。牛结节性皮肤病, 又称牛疙瘩皮肤病或牛结节疹，临床以病牛皮肤、黏膜和内脏器官表面出现广泛性结节，淋巴结肿大，皮肤水肿，局部形成坚硬的结节或溃疡为特征的疫病。患牛食欲下降，精神萎靡，皮肤受损，奶牛产奶量减少，公牛暂时或永久不育。该病是世界动物卫生组织（OIE）规定的法定报告传染病，是《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》中的一类传染病，我国暂对其按二类动物疫病进行管理。该病主要在非洲、欧洲、中亚呈地方性流行。牛结节性皮肤病一旦大规模爆发将对我国养牛业带来非常严重的影响，也给防控工作带来巨大的压力。山羊痘和绵羊痘合称羊痘，又名羊“天花”，是羊的一种急性、热性、接触性传染病。世界动物卫生组织（OIE ）将该病列为法定通报传染病，我国将其列为一类动物疾病。临床主要以发热，无毛或少毛部位的皮肤或黏膜发生红斑、丘疹、疱疹、水泡等为特征。易感羊群的致死率可达10%～100%不等，羔羊的致死率达 100%。羊痘是所有动物痘病中最为严重的一种疫病，感染后奶羊产奶下降、肉羊体重减轻、皮毛质量下降、母羊流产、造成巨大的经济损失。该病呈世界性分布，近年来我国在广西、贵州、黑龙江、甘肃等地也时有发生。鉴于山羊痘病毒属病毒成员对牛羊养殖业存在的严重威胁，建立一种简便、快速区分山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒的检测方法就显得十分紧迫和尤为必要。

现已经公开了采用水解探针法(TaqMan或TaqMan-MGB)检测或鉴别山羊痘 病毒属病毒的试剂盒及检测方法，例如中国的发明专利201911342156.7和 201410394083.7等。利用该方法进行山羊痘病毒属病毒鉴别诊断时，需要加入 1对引物和3条探针，成本较高，操作步骤繁杂。

发明内容

本发明提供一种克服现有技术不足、可用于检测鉴别山羊痘病毒、绵羊痘 病毒、牛结节性皮肤病病毒，并具有特异性强、敏感度高、方法简便、检测成 本低廉的试剂盒及其使用方法。

本发明的检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节 性皮肤病病毒)的试剂盒内包括序列为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的特异性 引物。

优选地，本发明的检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒、绵羊痘病毒、 牛结节性皮肤病病毒)的试剂盒内还有序列为SEQ ID NO.3的标准对照GTPV 核苷酸、序列如SEQID NO.4所述的标准对照SPPV核苷酸和序列为SEQ ID NO.5 的标准对照LSDV核苷酸。

为方便使用，本发明的检测鉴别山羊痘病毒属病毒(山羊痘病毒、绵羊痘 病毒、牛结节性皮肤病病毒)的试剂盒内还有饱荧光染料和qPCR反应预混液。