[发明专利]一种检测去乙酰化酶用纳米传感器及其检测方法和应用

说明书

本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种检测去乙酰化酶用纳米传感器及其检测方法和应用。所述纳米传感器包括带有赖氨酸乙酰基且有Cy5标记的肽底物和被链霉亲和素包被的量子点，通过链霉亲和素‑生物素化相互作用将所述肽连接到链霉亲和素修饰的量子点表面。该纳米传感器具有较高的特异性和灵敏度，并且，检测步骤简单，无需任何洗涤和分离步骤，无放射性污染物的产生。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种检测去乙酰化酶用纳米传感器及其检测方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

赖氨酸侧链的乙酰化是重要的翻译后修饰，在多种信号传导环境中影响蛋白质功能。赖氨酸的乙酰化状态受赖氨酸乙酰化酶和赖氨酸去乙酰化酶的调控。Sirtuin 1(SIRT1)是一种重要的组蛋白去乙酰化酶，它可以利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)代替锌作为辅因子来催化乙酰基从赖氨酸残基上去除。SIRT1与许多生物学过程密切相关，其中包括应激反应、DNA修复、代谢及凋亡、衰老。因此，SIRT1活性的检测具有重要意义。

组蛋白去乙酰化酶的检测方法包括放射性标记法、高效液相色谱法、免疫印迹法、分光光度法、质谱法。传统的放射性测定法通过监测放射性标记的肽所释放的[3H]乙酸盐或放射性标记的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)所释放的[14C]烟酰胺来检测SIRT1的活性。高相液相色谱法以液体为流动相，利用底物与产物之间不同的洗脱特性，从而在柱内将各种成分分离，进入检测器进行检测。免疫印迹法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。分光光度法通过测定酶在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，进而对该酶进行定性和定量分析。质谱法通过在自组装单分子膜上形成的肽阵列与质谱的结合，从而提供了一种无标记的方法来鉴定酶活性的模式。

但是，发明人发现，这些方法存在产生放射性废物、需通过溶剂萃取和离子交换树脂分离反应产物、步骤操作繁琐以及复杂的标记底物等缺点。为了克服上述缺陷，通过结合编码荧光探针、分子内酯交换探针和聚集诱导发射型探针，利用发光分析法，用于SIRT1活性测定。然而，这些方法需要通过肽/抗体的共价标记制备探针，操作繁琐。因此，非常需要设计一种简单的方法来准确，灵敏地检测SIRT1活性。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本公开的目的是提供一种检测去乙酰化酶用纳米传感器及其检测方法和应用，该纳米传感器具有较高的特异性和灵敏度，并且，检测步骤简单，无需任何洗涤和分离步骤，无放射性污染物的产生。

具体地，本公开的技术方案如下所述：

在本公开的第一方面，提供一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，所述纳米传感器包括带有赖氨酸乙酰基且有Cy5标记的肽底物和被链霉亲和素包被的量子点，通过链霉亲和素-生物素化相互作用将所述肽连接到链霉亲和素修饰的量子点表面。

在本公开的第二方面，提供一种检测去乙酰化酶用纳米传感器的检测方法，具体检测方法如下：

(1)、将待检测样品加入至生物素化试剂，进行生物素化；

(2)、将步骤(1)获得的生物素化产物加入到含有量子点的缓冲溶液中孵育，获得检测去乙酰化酶用纳米传感器；

(3)、采用全内角反射荧光技术的单分子荧光成像系统对Cy5的荧光信号进行检测，以定量检测待测样品中的去乙酰化酶。

在本公开的第三方面，提供一种检测去乙酰化酶用纳米传感器在检测去乙酰化酶活性和/或筛选去乙酰化酶抑制剂和/或检测细胞中的去乙酰化酶中的应用。