[发明专利]一种高效提取猪链球菌RNA的方法

说明书

本发明公开了一种高效提取猪链球菌RNA的方法，属于细菌与RNA提取技术领域。本发明方法为：为先使用含吐温20的溶液孵育猪链球菌菌体，再采用Trizol法提取猪链球菌的RNA。本发明在常规Trizol法提取猪链球菌RNA的基础上，增加了吐温20与猪链球菌的孵育过程，当加入0.75％的吐温20时可有效提高Trizol法提取猪链球菌RNA，且提取的RNA具有产量高、纯度高的优点，可以直接用后期分子生物学实验。

技术领域

本发明属于细菌与RNA提取技术领域，具体涉及一种高效提取猪链球菌RNA的方法。

背景技术

猪链球菌是具有荚膜多糖的革兰氏阳性菌，呈圆形或卵圆形，常呈长短不一的链状排列，主要定植在猪的呼吸道和消化道。根据表面荚膜多糖抗原不同，猪链球菌被分为35种血清型，其中血清2型猪链球菌在拥有养猪产业的地区流行最广泛，严重危害养猪业的健康发展。到目前为止，猪链球菌是给世界养猪业造成巨大经济损失的重要病原之一，主要引起猪的脑膜炎、肺炎、关节炎、心内膜炎、败血症等疾病综合征，常引起被感染猪急性死亡，因此治疗往往效果不佳。近年来，猪链球菌也给公众健康带来极大威胁，这是因为该病原也是一种重要的人兽共患病病原体，主要引发人的中毒性综合征、心内膜炎和脑膜炎。根据2013年12 月份的统计，全世界总共有1642例感染猪链球菌的人被报道。鉴于此，加大对猪链球菌致病机制的研究，将为研发有效治疗和预防猪链球菌感染的策略奠定基础。

目前针对猪链球菌致病机制的研究，主要集中在对其致病因子的鉴定及其功能研究。猪链球菌基因组中的基因超过2100多个，然而目前猪链球菌中被报到的毒力因子不超过30个。再者猪链球菌在临床中的感染事件时有爆发，说明针对这些致病因子制定的防控策略并不能有效防控猪链球菌的感染。因此，加大对猪链球菌中新的致病因子鉴定及其功能研究显得尤为重要。目前鉴定微生物致病因子的方法多种多用，其中高通量测序方法使用最广泛且效率很高。转录组测序技术(RNA-seq)、染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)、基因芯片(genechip) 和差异定量蛋白质组学(iTRAQ)等在鉴定细菌致病因子中经常被使用。这些高通测序方法能否鉴定出真正的致病因子，关键在于对测序前样本的制备或对初筛基因的鉴定。有些高通量测序需要高质量的RNA样品或者有些高通量测序结果需要以高质量的RNA样品为检测对象，因此，获取高质量的RNA样品，可以有效提高通量测序方法鉴定猪链球菌中致病因子的效率。

利用现有技术方法提取的猪链球菌RNA浓度低，因此需要培养大量细菌，浪费试剂耗材；而且提取的RNA纯度低，含有大量杂质，不能满足后期实验需求，因此需要做进一步复杂的纯化操作，浪费时间和金钱。因此，研发高效提取猪链球菌RNA的方法意义重大。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种高效提取猪链球菌RNA的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种高效提取猪链球菌RNA的方法，为先使用含吐温20的溶液孵育猪链球菌菌体，再采用Trizol法提取猪链球菌的RNA。

进一步地，所述使用含吐温20的溶液孵育猪链球菌菌体为：使用含吐温20浓度1.0％(体积百分浓度)以下的溶液孵育猪链球菌菌体。

进一步地，所述使用含吐温20的溶液孵育猪链球菌菌体为：在0-37℃孵育10-30min。

进一步地，所述含吐温20的溶液为含吐温20的缓冲液，更一步地为含吐温20的TE缓冲液。

进一步地，所述使用含吐温20的溶液孵育猪链球菌菌体为：用40-50μL的TE缓冲液重悬收集的1.0×10⁸-1.0×10⁹CFU猪链球菌菌体，加入吐温2使吐温20终浓度为0.1-1.0％，再在0-37℃孵育10-30min。