[发明专利]一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：包括核酸扩增反应液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反应液、阳性对照液、弱阳性对照液和阴性对照液。

2.根据权利要求1所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述甲/乙型流感病毒混合反应液包括甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探针、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针和DEPC水。

3.根据权利要求1所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述核酸扩增反应液包括核苷酸混合液、Buffer、MgCl₂溶液和DEPC水。

4.根据权利要求1所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括DNA聚合酶、逆转录酶、UNG酶、RNA酶抑制剂和稀释液。

5.根据权利要求1所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照液包括甲型流感病毒病毒样颗粒、乙型流感病毒病毒样颗粒、RNase P病毒样颗粒和TE缓冲液；所述弱阳性对照液为取1μL的阳性对照液与999μL的TE缓冲液混合制成；所述阴性对照为0.9％的氯化钠溶液。

6.根据权利要求2所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探针、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针。

7.根据权利要求6所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述内参RNase P上游引物的序列为AGATTTGGACCTGCGAGCG，所述内参RNase P下游引物的序列为GAGCGGCTGTCTCCACAAGT，所述内参RNase P探针序列为TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。

8.根据权利要求6所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：所述甲型流感病毒上游引物的序列为CTCATGGAATGGCTAAAGACAAG，所述甲型流感病毒下游引物的序列为TCCTCGCTCACTGGGCA，所述甲型流感病毒探针的序列为CCAATCCTGTCACCTCTGACTAAGGGGATTTT，所述乙型流感病毒上游引物的序列为CACCAGAAGAGGGAGACAATTAG，所述乙型流感病毒下游引物的序列为GTCAGCTATTATGGAGCTGTTAGC，所述乙型流感病毒探针的序列为GGTCACGGAAGAACTTTATCTTTTAAGTAAA。

9.一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒的使用方法，其特征在于，使用权利要求1-8任一项所述的试剂盒，包括如下步骤：

S100、预处理，分别取出核酸扩增反应液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反应液、阳性对照和阴性对照，并在室温下融化，充分振荡混匀后瞬间离心；

S200、配置反应液并放在PCR反应管中，每个PCR反应管中20μL；

S300、提取核酸；

S400、加样，在步骤S200配置的反应液中分别加入待测样本、阳性对照和阴性对照核酸各5μL，盖紧管盖，瞬时离心；

S500、扩增检测，将步骤S400得到的PCR反应管放置在荧光定量PCR仪中进行扩增检测；

S600、通过内参检测判断结果准确性。

10.根据权利要求9所述的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S200中的配置反应液为核酸扩增反应液12μL/人份、酶混合液4μL/人份、甲/乙型流感病毒混合反应液4μL/人份；所述步骤S500中的荧光定量PCR仪的扩增检测循环参数如下：