[发明专利]一种基于富硒土壤中微生物多样性指数分析方法

权利要求书

1.一种基于富硒土壤中微生物多样性指数分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、称取富硒土壤样本，并进行微生物DNA提取；

B、对提取的宏基因组DNA进行质量检测，基因组DNA的纯度和完整性检测分别通过NanoDrop微量分光光度计和琼脂糖凝胶水平电泳完成，DNA质量浓度通过Qubit检测获得；

C、采用二代测序技术进行高通量测序，需要对提取的宏基因组样本进行文库构建；

D、数据分析：测序得到的原始数据中，使用FastQC对下机数据进行质控，生成质检报告，根据质检报告结果对数据进行过滤，以去除接头序列的低质量数据，然后进行后续分析，通过快速比对准确估计物种的相对丰度，得到微生物群落组成信息，使用GraPhlAn基于分类等级绘制可视化进化树，构建物种群落结构图。

2.根据权利要求1所述的基于富硒土壤中微生物多样性指数分析方法，其特征在于，步骤C所述的文件库构建步骤如下：

(1)对微生物样本的基因组DNA进行处理，使其成为单链DNA；

(2)将步骤(1)中获得的单链DNA与特殊标签引物接头进行连接，获得一端连接有特殊标签引物接头的单链DNA；

(3)对步骤(2)中一端连接有特殊标签引物接头的单链DNA进行延伸，形成一端连接有特殊标签引物的双链DNA；

(4)对步骤(3)获得的双链DNA与双链接头进行连接，获得两端均连接有接头的双链DNA；

(5)对步骤(4)获得的两端均连接有接头的双链DNA进行扩增，获得微生物多样性文库。

3.根据权利要求1所述的基于富硒土壤中微生物多样性指数分析方法，其特征在于，步骤A所述微生物DNA提取的条件如下：称土样于离心管中，加提取液涡旋混匀后置于冰箱静止或液氮速冻，取出水浴融化，反复冻融，加蛋白酶K，摇床振荡，加SDS，水浴在室温离心，收集上清，沉淀加提取液和20％SDS，涡旋水浴然后在室温下离心，合并上清；上清中加聚己二醇800混匀，沉淀过夜；然后离心，弃上清，沉淀加入1×TE溶解；用等体积的氯仿：异戊醇抽提，离心后收集上清，重复一次；用NaAc和异丙醇室温沉淀，离心后弃上清；沉淀用70％乙醇洗涤，离心后弃上清，晾干，加超纯水溶解。