[发明专利]一种快速区分蛹虫草交配型的检测方法及检测引物组

说明书

本发明公开了一种快速高效检测蛹虫草不同菌株交配型的方法及检测引物组，本发明基于等温扩增技术，设计检测蛹虫草不同菌株交配型MAT1‑1和MAT1‑2的特异性引物(Cm1F/Cm1FIP/Cm1BIP/Cm1B和Cm2F/Cm2FIP/Cm2BIP/Cm2B)；四条引物Cm1F/Cm1FIP/Cm1BIP/Cm1B用于蛹虫草MAT1‑1交配型的检测，另外四条引物Cm2F/Cm2FIP/Cm2BIP/Cm2B用于MAT1‑2交配型的检测。本发明检测结果特性性强，简单快速，只需将试剂混合后置于恒温水浴锅中反应，通过混合液的颜色即可快速区分交配型。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种快速区分蛹虫草交配型的检测方法及检测引物组。

背景技术

蛹虫草(Cordyceps militaris)是虫草属真菌的模式种，又称为北冬虫夏草等，属药食两用真菌，隶属于子囊菌门(Ascomycota)，粪壳菌纲(Sordariomycetes)，肉座菌目(Hypocreales)，虫草科(Cordycipitaceae)，虫草属(Cordyceps)。近几十年来，蛹虫草资源的研究和开发取得了很大进展，目前已实现大规模人工栽培。

蛹虫草为二极性异宗结合真菌，具有MAT1-1和MAT1-2两种交配型，其有性生殖需要两种交配型菌株的参与。作为生产使用的菌种，需明确不同来源菌种的交配型，避免部分遗传背景等特征不清楚，例如不单一或混杂的菌种同时有两个交配型，导致蛹虫草栽培形成畸形子实体，品质下降甚至减产等严重问题。目前为止，为明确不同来源菌种交配型，需进行PCR反应以明确菌株的交配类型，这种对不同菌种交配型鉴定的方法存在效率低，需要鉴定所需时间长，步骤繁琐，需要PCR预变形、温度循环、胶电泳和紫外显影等步骤。因此，研究快速检测蛹虫草菌株交配型的方法，对于菌种鉴定、改良和子实体的培育具有重要理论和实践价值。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种快速区分蛹虫草交配型的检测方法。本发明检测结果特性性强，简单快速，只需将试剂混合后置于恒温水浴锅中反应，通过混合液的颜色即可快速区分交配型。

一种快速区分蛹虫草交配型的检测引物组，包括蛹虫草交配型MAT1-1引物组和蛹虫草交配型MAT1-2引物组；蛹虫草交配型MAT1-1引物组包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ IDNO:2、序列SEQ ID NO:3和序列SEQ ID NO:4；所述蛹虫草交配型MAT1-2引物组包括序列SEQID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ ID NO:8。

一种快速区分蛹虫草交配型的检测方法，包括如下步骤：

步骤一、将待检测物和环介导等温扩增缓冲液分别与蛹虫草交配型MAT1-1引物组和蛹虫草交配型MAT1-2引物组混合，得到混合反应液；蛹虫草交配型MAT1-1引物组包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ ID NO:2、序列SEQ ID NO:3和序列SEQ ID NO:4；所述蛹虫草交配型MAT1-2引物组包括序列SEQ ID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ IDNO:8；

步骤二、将混合反应液加热进行环介导等温扩增；

步骤三、若加入蛹虫草交配型MAT1-1引物组的混合反应液变色则待检测物为蛹虫草交配型MAT1-1；若加入蛹虫草交配型MAT1-2引物组的混合反应液变色则待检测物为蛹虫草交配型MAT1-2。