[发明专利]一种中华绒螯蟹雄性特异Etse基因及其应用

说明书

本发明公开了一种中华绒螯蟹雄性特异Etse基因及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，雄性特异分子标记引物如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示，上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因、其编码蛋白或雄性特异分子标记引物用于中华绒螯蟹性别鉴定，鉴定方法包括：采用雄性特异分子标记引物进行PCR扩增，反应结束后进行电泳检测，结果显示一条特异性条带的中华绒螯蟹为雄性，电泳结果显示没有特异性条带的中华绒螯蟹为雌性，方法简单高效，可在分子水平上快速实现中华绒螯蟹的性别鉴定。

技术领域

本发明涉及中华绒螯蟹雄性特异Etse基因及其在性别鉴定中的应用，属于中华绒螯蟹性别鉴定技术领域。

背景技术

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)，俗称河蟹，隶属于节肢动物门(Arthropoda)、甲壳亚门(Crustacean)、软甲纲(Malacostraca)、十足目(Decapoda)、方蟹科(Grapsidae)，绒螯蟹属(Eriocheir)，广泛分布于我国自北向南的各大水系中，主要包括辽河、黄河、长江、瓯江、闽江、珠江和南流江水系，是我国重要的水产养殖对象和经济蟹类之一。2019年我国中华绒螯蟹养殖的产量达77.9万吨，产值约690亿元。一般而言，中华绒螯蟹的雄性个体较雌蟹大，精巢发育成熟后的副性腺富含人类所需的必需氨基酸、不饱和脂肪酸，维生素等，为人们喜吃的白膏，雌性个体卵巢发育成熟后的红膏味道鲜美，口感与雄蟹性腺(白膏)不一致。白膏和红膏口味不同，深受广大消费者的喜爱。因此开展中华绒螯蟹性别调控研究，实现中华绒螯蟹性别控制育种及养殖具有较大的市场前景。

性别特异基因的获得是实现中华绒螯蟹性别控制育种及阐述其性别决定分子机制的重要前提。然而目前有关中华绒螯蟹的性别决定基因仍未可知，至今仍然没有明确的中华绒螯蟹性别决定机制报道，因此需要获得一种中华绒螯蟹性别特异基因的分子标记。

发明内容

本发明的第一目的是，提供中华绒螯蟹雄性特异Etse基因的核苷酸序列。

本发明的第二目的是，提供上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因编码蛋白的氨基酸序列。

本发明的第三目的是，提供上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因的扩增方法。

本发明的第四目的是，提供一种基于上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因设计的雄性特异分子标记引物。

本发明的第五目的是，提供上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因、上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因编码蛋白或上述雄性特异分子标记引物在中华绒螯蟹性别鉴定中的应用。

本发明的第六目的是，提供一种中华绒螯蟹性别鉴定的方法。

为实现上述第一目的，本发明采用的技术方案是：

中华绒螯蟹雄性特异Etse基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

为实现上述第二目的，本发明采用的技术方案是：

上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

为实现上述第三目的，本发明采用的技术方案是：

上述中华绒螯蟹雄性特异Etse基因的扩增方法，包括以下步骤：

(1)提取中华绒螯蟹雄性性腺的总RNA；

(2)以步骤(1)中的总RNA为模板，以oligo dT为反转录引物，进行精巢cDNA的合成；

(3)以上述cDNA为模板，以如SEQ ID NO:3所示的序列为上游引物、如SEQ ID NO:4所示的序列为下游引物，进行PCR扩增，得到中华绒螯蟹雄性特异Etse基因。