[发明专利]一种用于猪蓝耳病毒全基因组测定的成套引物对及其应用

权利要求书

1.一种用于猪蓝耳病毒全基因组测定的成套引物对，其特征在于：包括12对引物，12对引物分别为1引物片段、2引物片段、3引物片段、4引物片段、5引物片段、6引物片段、7引物片段、8引物片段、9引物片段、10引物片段、11引物片段和12引物片段，1引物片段包括引物序列1F：5’-ATGACGTATTGGTGTTGGCTC-3’和1R：5’-CACCATGCTTGGTTTGATAGCC-3’；2引物片段包括引物序列2F：5'-GTGCTATGGCTGACGTCTATGACA-3’和2R：5'-AAGACTTGTTGCACCACGGAGGTA-3’；3引物片段包括引物序列3F：5'-CAAGTTATTGAGGATTGCTGCTGC-3’和3R：5'-CGTGTGAGGTAACATCACAAACCC-3’；4引物片段包括引物序列4F：5'-CATGTGGGATAGGGTTGACATGCT-3’和4R：5'-CTGATCTTTAGTCCGTTCAGCTGG-3’；5引物片段包括引物序列5F：5'-ACTGTGGTCGCTCAGCCTTATGAT-3’和5R：5'-TTCCAGTTCAGGTTTGGCAGCAA-3’；6引物片段包括引物序列6F：5'-CAGGCCAGTTTTGTAATGTG-3’和6R：5'-GCGGCTAGCAGTTTAAACACTGCT-3’；7引物片段包括引物序列7F：5'-GCCCTTGGTATGATGAACGT-3’和7R：5'-AGATGTTCAACCCACCAGTGGT-3’；8引物片段包括引物序列8F：5'-CAGCACATGGTGCTCAGTTACT-3’和8R：5'-TCTGCAATTGCCTGTGTGGGTCAT-3’；9引物片段包括引物序列9F：5'-ACTCCAGTCAAGGCGCCACATT-3’和9R：5'-CTTCTGTAATTGCTCAGGGTGAACG-3’；10引物片段包括引物序列10F：5'-TCGGATACAGCGTATCTGTACGAG-3’和10R：5'-AGCCACGATGCCTGACACATT-3’；11引物片段包括引物序列11F：5'-GACATCAGCTGCCTTAGGCAT-3’和11R：5'-AACAGCTTTTCTGCCACCCAACACG-3’；12引物片段包括引物序列12F：5'-TGATAACCACGCATTTGTCGTCCG-3’和12R：5'-AATTACGGCCGCATGGTTCTCGCCA-3’。

2.一种用于猪蓝耳病毒全基因组测定的成套引物对的应用，其特征在于，包括下列步骤：

(1)感染猪蓝耳病毒的样品预处理，剪取感染猪蓝耳病毒的猪仔的组织病料新鲜切面处约2～3cm3大小，在已预冷的研钵内进行研磨，研磨充分后取病料置于离心管内备用；

(2)核酸提取，将盛有病料的离心管通过病毒病毒提取试剂盒提取RNA；

(3)扩增，取步骤(2)中提取的RNA为模板用权利要求1中每对所述引物进行RT-PCR扩增反应获得扩增产物，每对引物的片段扩增3次；

(4)分析，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，在凝胶成像系统上观察并拍照，并对观察到的结果进行统计和分析。

3.如权利要求2所述的一种用于猪蓝耳病毒全基因组测定的成套引物对的应用，其特征在于，所述步骤(3)中的RT-PCR扩增反应的猪蓝耳病毒特异性基因扩增反转录体系为：在离心管中配制模板RNA/引物混合液，2×ES Reaction Mix 5μL，2×ES Reaction Mix 5μL，EasyScriptTMⅡRT/RI Emzyme Mix 4μL，下游引物1μL，模板RNA 2μL，反应体系为12μL，42℃反应30min，然后85℃恒温5min，得到的cDNA用于PCR扩增。

4.如权利要求2所述的一种用于猪蓝耳病毒全基因组测定的成套引物对的应用，其特征在于，所述步骤(3)中RT-PCR扩增反应的PCR反应体系为：2×PCR Mix 12.5μL，10μmol/L的上游引物与10μmol/L的下游引物各0.5μL，反转录产物1μL，ddH₂O 10.5μL，反应体系为25μL。