[发明专利]一种具有靶向抑制鳗弧菌的核酸适配体H11及其应用

说明书

本发明涉及一种核酸适配体，尤其涉及一种具有靶向抑制鳗弧菌的核酸适配体H11，核酸序列如SEQ.NO.1所示。以及所述的核酸适配体H11在制备鳗弧菌抑制剂中的应用。本发明以鳗弧菌为靶标，选取Cell‑SELEX技术筛选出的适配体（H11）对其进行抗菌功能进行分析。具有筛选周期短、化学合成简便、能替代抗生素等作用，具有较好的应用前景。为进一步开展抑制性适配体的研究提供理论基础。

技术领域

本发明涉及一种核酸适配体，尤其涉及一种具有靶向抑制鳗弧菌的核酸适配体H11及其应用。

背景技术

前言

鳗弧菌是水产养殖中最为常见的条件致病菌之一，其引起的水产养殖动物疾病在全球范围内流行，可感染50多种海淡水生物包括虹鳟、鳗鲡、香鱼、鲈鱼、鳕鱼、大菱鲆、牙鲆、黄鱼等。目前随着水产养殖向高密度、集约化发展的同时，养殖动物感染弧菌病数量也日益增加，给水产养殖业带来巨大的经济损失。由于鳗弧菌对水产养殖造成的严重危害，主要使用大量抗生素来防治弧菌，这不仅导致细菌耐药性产生，还给水产品质量安全带来巨大风险和隐患。

核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment,SELEX)从体外人工合成筛选得到的一种单链寡核苷酸序列包括ssDNA和RNA。它具有亲和特异性高、易于修饰，稳定性高、无免疫原性及毒副作用等特点，已在生命科学研究、靶点鉴定、生物医学、环境监测等多个领域受到广泛关注。随着科学技术水平的提高，核酸适配体作为治疗试剂方面的研究也越来越广泛。1992年Bock LC等人分离了凝血级的蛋白酶凝血酶单链DNA适配体，适配体能在体外抑制凝血酶催化的纤维蛋白-血栓形成。2006年Ng EW等人对适配体Pegaptanib进行临床实验，证明了其在治疗与年龄相关的黄斑变性脉络膜新生血管方面是有效的。这是第一个被批准用于人类的适配体治疗药物。2020年Shuhao Zhu等人发现适配体BT200在体外对人的血管性血友病因子有良好的抑制作用，并能预防非人灵长类动物的动脉阻塞。因此，研究适配体作为抑制剂是一个很有前途的发展，具有潜在的广泛的治疗益处。

发明内容

本发明要解决的技术问题，在于提供一种具有靶向抑制鳗弧菌的核酸适配体H11及其应用。

本发明是这样实现的：

本发明首先提供了一种靶向抑制鳗弧菌的核酸适配体H11，其核酸序列如SEQ.NO.1所示。

SEQ.NO.1：

TCAGTCGCTTCGCCGTCTCCTTCTCCCTCTTGTGCTCCCTCTTGGTGCAGCCTGACCCTCTGGGGTCTCCCTCTTGTGC

本发明还提供了所述核酸适配体H11在制备鳗弧菌抑制剂中的应用，所述核酸适配体H11在抑制剂中的浓度为0.5-1.5μM。

优选地，所述核酸适配体H11在抑制剂中的浓度为1μM。

具体应用时，将核酸适配体H11在95℃水浴变性5min,然后转于冰上放置10min；取0.5-1.5μM核酸适配体H11100μL/孔与200μL/孔OD 0.1的鳗弧菌菌液混合培养。

进一步地，采用LB液体培养基将鳗弧菌菌液稀释至OD 0.1。

进一步地，所述核酸适配体H11使用时用1×TE缓冲液配制稀释。

进一步地，所述培养，在光照培养箱中28℃培养72h。