[发明专利]一种家蝇衍生抗菌肽D-26M及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种家蝇衍生抗菌肽D‑26M及制备方法和应用，对家蝇抗真菌肽MAF‑1A进行氨基酸残基替换和右旋改造获得D‑26M，其序列如序列表SEQ IQ No.2所示；使用多肽合成仪进行固相合成多肽，使用反向高效液相色谱进行纯化，最后进行氨基酸分析及质谱鉴定。本发明在保证高抗菌活性的情况下，提高了D‑26M的稳定性和细胞选择性；D‑26M具有更强的阳离子性、疏水性以及渗透到病原菌双层膜的能力，具有广谱的抗菌活性及高效抗炎活性，尤其是对多重耐药性鲍曼不动杆菌，对在体内外环境中的游离态鲍曼不动杆菌及其形成的生物被膜均有很好的抗性，且能有效抑制革兰阴性菌外膜LPS的活性。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗菌肽及制备方法和应用，特别涉及一种家蝇衍生抗菌肽D-26M及制备方法和应用。

背景技术

据2016年发表的《抗菌药物评论》估计，目前全世界每年有70万人死于耐抗生素病原体引起的感染，到2050年，如果不能找到减缓耐药性出现的解决方案，每年将有1000万人面临生命危险。鲍曼不动杆菌在临床标本中的分离率和耐药率逐年上升，这已是导致医院感染的主要条件致病菌；革兰氏阴性菌感染过程中释放的内毒素(LPS)持续刺激机体免疫系统，诱发病原菌感染引起的内毒素休克、败血症、泌尿系感染、院内获得性肺炎等，尤其在重症监护病房(intensive care unit，ICU)，致死率高达52％。另外，鲍曼不动杆菌能够持续存在于外界环境中，该致病菌严重危害公共健康，使其成为人们亟待解决的问题。目前研究显示，鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药率高达66％，对被认为是临床治疗耐药性细菌感染最优手段的碳青霉烯类抗生素的耐药率已达46～66％，而在所有接受多粘菌素治疗鲍曼不动杆菌感染的患者中，约有一半患者出现急性肾损。因此，临床上亟需对抗鲍曼不动杆菌感染的新型抗菌药物，世界卫生组织也将针对鲍曼不动杆菌的新药研发列为最优先级/关键性病原体。

抗菌肽(Antimicrobial peptiDes，AMPs)是生物体抵抗外界病原体感染的小分子多肽。相较传统抗生素，AMPs具有抗菌谱广、抗菌机理独特并且不易产生耐药性的特性，具备新型抗菌药物开发的巨大潜力，极有希望替代传统抗生素用于临床治疗。但是，AMPs又存在稳定性差、活性低等缺点，从而限制了AMPs的临床应用。因此，根据已知能够影响AMPs生物活性的因素，进行AMPs分子改造及筛选高效衍生肽来克服AMPs的不足，这已成为肽类抗菌药物开发的重要研究领域。影响AMPs生物学活性的重要因素有AMPs的氨基酸组成、肽链长度、净电荷量、α-螺旋性等。家蝇(Musca Domestica)是呈世界性分布的媒介昆虫，由于孳生环境中病原微生物的结构和多样性复杂，其以抗菌肽为效能分子的高效抗病能力受到广泛关注。

发明内容

本发明的目的在于提供一种家蝇衍生抗菌肽D-26M，该衍生抗菌肽在保有AMPs高抗菌活性的同时，可提高其稳定性和细胞选择性。

为实现上述目的，一种家蝇衍生抗菌肽D-26M，其序列如序列表SEQ ID No.2所示。

优选的，所述抗菌肽D-26M具有α-螺旋结构。

本发明的另一目的在于提供一种家蝇衍生抗菌肽D-26M的制备方法，该制备方法成本低，所制备得到的衍生抗菌肽D-26M可具有更强的阳离子性、疏水性以及渗透到病原菌双层膜的能力。

为实现上述目的，一种家蝇衍生抗菌肽D-26M的制备方法，具体方法步骤如下：

(1)采用氨基酸残基替换法对多肽MAF-1A进行氨基酸序列突变并右旋改造，多肽MAF-1A的序列如序列表SEQ IQ No.1所示；具体过程为：用右旋Lys替换多肽MAF-1A氨基酸序列中的Glu和Asp；用右旋Leu替换多肽MAF-1A氨基酸序列中的Gln和第23位的Lys；用含有吲哚侧链的右旋Trp替代新肽MAF-1A氨基酸序列中的第9和第15位的Lys；对多肽MAF-1A中的余下氨基酸均采用相应的右旋氨基酸进行替换；获得长度为26的衍生抗菌肽D-26M，其序列如序列表SEQ IQ No.2所示；