[发明专利]基于固相萃取-液质联用的生物样品中浙贝母三种活性成分的检测方法

权利要求书

1.基于固相萃取-液质联用的生物样品中浙贝母三种活性成分的检测方法,其特征是：该检测方法包括以下步骤：

1)、大鼠灌胃给药贝母提取物，剂量为0.5-1g/kg，给药后1小时眼丛动脉取全血0.3-1mL于含有肝素钠的抗凝管中,离心后取上清血浆，同时给药后0-4小时收集尿液和粪便样本；

2)、取步骤1)中收集的液体样本50-200µL；固体样本0.05-0.1g，每g固体样本加入30-40mL甲醇提取，涡旋离心后，取上清液移入收集管，真空离心浓缩，得浓缩干燥样本，用0.5-1mL水复溶；所述的液体样本为收集的血浆样本和尿液样本，所述的固体样本为收集的粪便样本；将血浆、尿液和粪便样本浓缩干燥12-24小时至完全干燥后再进行称重；

3)、将上述液体样本和提取后的固体样本加入到预先用3mL甲醇和3mL水活化处理后的MCX混合型阳离子交换柱中，而后依次用6mL水和6mL甲醇洗涤，弃去洗涤液，再用3mL氨水-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，真空离心浓缩，得浓缩干燥样本；所述氨水-甲醇溶液的浓度为3%-10%；

4)、将步骤3)得到的浓缩干燥样本再用甲醇溶液涡旋复溶，每1mg提取浓缩干燥样本用50-200µL的甲醇溶液，然后经滤膜过滤后，在一定的条件下进行液相色谱质谱联用仪分析；所谓的一定的条件包括采用的液相检测条件和采用的质谱检测条件；其中：所述的液相检测条件为：C18色谱柱规格2.1×150mm×1.7μm，流速0.3mL/min，柱温40℃，进样体积为2μL；液相色谱流动相A为含0.1%的甲酸水溶液，B相为纯乙腈，采用梯度程序洗脱，初始时为20%B相，保持2分钟；随后在5分钟内线性 升高到55%B相；接着在0.1分钟内升高到90%B相，并冲洗系统3分钟，然后在 0.1分钟内恢复到20%B相，平衡2分钟；所述的质谱检测条件为：采用ESI正离子模式，喷雾电压3kV，毛细管温度为150℃，干燥气流速为1000L/h，干燥气温度为400℃；方法采用MS^E采集模式，高低碰撞能量分别设置为30和5eV，扫描范围为100-1500m/z；

5)、在与步骤4)相同的条件下，将标准样品溶液进行液相色谱质谱联用仪分析，所述的标准样品为浙贝甲素，浙贝乙素，贝母辛，通过标准样品获得的质量数，保留时间和二级碎片，对血浆、尿液和粪便样品中是否含有上述标准样品中的物质进行定性；

6)、标准曲线样本溶液制备：将步骤5)中标准样品溶液逐级稀释，分别加入到空白血浆、空白尿液和空白粪便提取物中制备至少2个以上不同浓度的样品，采用与步骤3)相同处理方法进行处理并进行液相色谱质谱联用仪分析，建立线性曲线，根据对应的线性曲线进行血浆、尿液和粪便样品中各贝母活性成分的定量。