[发明专利]一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法

权利要求书

1.一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：包含以下步骤：

步骤一：对多孔收集板进行预处理，所述多孔板收集板预处理后进行高温灭菌；

步骤二：取血液样本加入内标工作液，震荡混匀20-40s，进行超细过滤；

步骤三：过滤完成后，过滤液中加入正己烷，震荡混匀后离心分离取上层清液置于采集管中收集；

步骤四：将采集管内液体经氮气吹干后，加入复溶液复溶，复溶后液体置于步骤一中的多孔收集板中，静置；

步骤五：取多孔收集板中液体，置于聚乙烯管中并加入洗脱液，洗脱完成后，通过涡旋振荡器振荡摇匀，摇匀后液体离心后取上清液通过滤膜过滤分离；

步骤六：分离后液体置于色谱柱内进行色谱分析。

2.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤一中预处理具体为在收集板表面涂抹表面活性剂。

3.根据权利要求2所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述表面活性剂具体为环氧乙烷-环氧丙烷共聚形成的嵌段式醚类共聚物(聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)。

4.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤一中高温灭菌，灭菌温度为80-12℃，灭菌时间为3-5min。

5.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤二中的血液样本中还添加有提取液，所述提取液具体为甲醇∶乙腈1∶1混合液，所述提取液与血液样本混合比为2∶1-3∶1。

6.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤二中超细过滤过滤孔径为0.4-0.6um，所述步骤五中滤膜过滤孔径为0.2-0.3um。

7.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤三中正己烷与过滤液的混合比为1∶5-1∶6，所述步骤三中振荡时间为3-5min，离心转速为12000r/min，离心温度为4℃。

8.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤四中复溶液具体为甲醇或者甲酸溶液，且所述氮气流量为2ml/min，静置时间为5-10min。

9.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤五中洗脱液与多孔收集板中液体的混合比为2∶1-3∶1，所述洗脱液具体为异丙醇与正己烷1∶1混合液，所述洗脱完成后液体在涡旋振荡器震荡时间为8-10min，且在高速冷冻离心机中以4℃ 13000r/min下离心8-12min。

10.根据权利要求1所述的一种降低脂溶性维生素多孔板非特异性吸附的方法，其特征在于：所述步骤五色谱柱具体为Waters ACQUITY UPC²色谱柱，所述色谱柱流速为0.8-1.2ml/min，且所述色谱分析采用乙腈作为助溶剂，流动相为CO₂超临界流体。