[发明专利]盐芥盐诱导表达基因TsHKT1;2启动子的克隆与应用

权利要求书

1.一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2，其特征在于，所述基因核苷酸序列如SEQ.ID.NO:1所示。

2.一种盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2启动子，其特征在于，所述启动子核苷酸序列如SEQ.ID.NO:2所示。

3.一种含有如权利要求2所述TsHKT1；2启动子的重组表达载体。

4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为在植物GUS表达载体pCambia1305.1的酶切位点插入所述TsHKT1；2启动子得到的重组质粒；在所述重组表达质粒中，TsHKT1；2启动子连接在GUS基因的上游。

5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述酶切位点为BamHⅠ和BglⅡ。

6.如权利要求4或5所述的重组表达载体，其特征在于，所述插入采用的扩增引物为：

FP2:TTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCGCGTTTGTCAAACTCGATTGG

RP2:AAATTTACCCTCAGATCTGGAGAGATTTAGCATGTTGCGA。

7.一种如权利要求2所述的TsHKT1；2启动子作为盐芥盐诱导上调启动子在植物基因改造工程中驱动目的基因表达的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，将含有所述TsHKT1；2启动子的重组表达载体转化农杆菌感受态GV3101，利用花序侵染法进行植物的遗传转化；所收种子经多代潮霉素筛选，获得纯系转基因植株。

9.一种如权利要求3所述的重组表达载体在植物抗盐机制中的应用。

10.一种如权利要求1所述的盐芥盐诱导表达基因TsHKT1；2在盐芥中的表达分析方法，其特征在于：

A.所述盐芥为：(1)萌发后4-10天的盐芥，经150-300mM NaCl处理2-30h；或(2)低温春化后正常光照培养10-20天的盐芥，经20-40天的150-300mM NaCl处理；

B.设计对所述TsHKT1；2基因的相对荧光定量PCR的引物如下：

上游引物：CTCTACTTCTCTCATTTCATTAACTTCAA

下游引物：GATCTGACTAGAAAGCTTGACATGATT；

C.以步骤A所得盐芥各组织RNA为模板进行荧光定量PCR反应，分析TsHKT1；2基因在盐芥各组织中的表达。