[发明专利]一种检测牛奶中抗生素的方法

说明书

本发明涉及一种检测牛奶中抗生素残留的方法，其包括如下步骤：准确称取待测样品至聚丙烯离心管中，加入表面活性剂的水溶液，漩涡震荡后超声再离心，取上清液；所述表面活性剂为酯基季铵盐阳离子表面活性剂；取上清液加入萃取溶剂中，漩涡振荡离心，取所得萃取液层减压蒸馏去除溶剂，再加超纯水稀释混匀，经滤膜过滤，得待测样品溶液；所述待测样品溶液经液相色谱‑串联质谱法测定抗生素的含量。本发明的检测方法具有高灵敏度，低成本，易操作等特点，可实现样品中多重抗生素的灵敏测定。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种检测牛奶中抗生素的方法。

背景技术

抗生素主要用于预防和治疗细菌性感染类疾病，以提高生产质量和效率，常作为兽药和饲料添加剂应用于畜禽养殖业中。在奶牛养殖中，抗生素主要用于治疗乳牛乳腺炎、腹泻等疾病。而泌乳期乳牛过量使用抗生素或休药期不足，可能导致牛奶中抗生素残留，并通过食物链对人类身体健康造成不良影响，如引起胃肠不适、产生过敏反应、导致肝功能损害等。此外，滥用抗生素或长期摄入含抗生素食品可能会产生细菌耐药性，对人类健康危害更加严重，同时，抗生素残留对环境也产生越来越大的影响。为了保障食品安全，我国农业部第235号公告规定了动物源性食品中抗生素最大残留限量(MRL)，许多国家及组织也制定了抗生素最大残留限量，其限量标准也越来越严格。因此，建立一种快速、简便、灵敏的多种抗生素检测方法十分必要。

目前，抗生素的检测方法主要有微生物和生物分析方法、酶联免疫法、液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。这些检测方法都涉及到样品前处理步骤，需要从牛奶中提取出抗生素。由于牛奶中含有蛋白质、脂肪、糖类等成分，萃取时有机相与水相的界面不清乳化状态很严重。采用常规的化学试剂并不能完全萃取出其中的抗生素成分，从而造成检测结果的准确度不高。

发明内容

为了提供一种检测牛奶中抗生素残留的方法，能够高灵敏度的实现多重抗生素的同时检测。具体而言，为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案：

本发明涉及一种检测牛奶中抗生素残留的方法，其包括如下步骤：

准确称取待测样品至聚丙烯离心管中，加入表面活性剂的水溶液，漩涡震荡后超声再离心，取上清液；所述表面活性剂为酯基季铵盐((ROOC)₄N⁺X^-)阳离子表面活性剂，其中X为氯或溴，R为C₆-C₁₈的直链或支链烷基；

取上清液加入萃取溶剂中，漩涡振荡离心，取所得萃取液层减压蒸馏去除溶剂，再加超纯水稀释混匀，经滤膜过滤，得待测样品溶液；

所述待测样品溶液经液相色谱-串联质谱法测定抗生素的含量。

在本发明的一个优选实施方式中，所述表面活性剂为双棕榈基乙酯基羟乙基甲基硫酸甲酯。

在本发明的一个优选实施方式中，所述萃取溶剂为四氯化碳和乙酸乙酯的混合溶剂。在本发明的一个优选实施方式中，所述混合溶剂中四氯化碳与乙酸乙酯的体积比为3:7～7:3；特别优选的体积比为1：1。

在本发明的一个优选实施方式中，所述抗生素选自磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类和大环内酯类抗生素中的至少2种；优选为3种；更优选为5种。

在本发明的一个优选实施方式中，所述磺胺类抗生素选自磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺异恶唑、苯酰磺胺、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺地索辛中的一种或者多种。

在本发明的一个优选实施方式中，所述喹诺酮类抗生素选自丹诺沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥比沙星、双氟沙星、恶喹酸、氟甲喹中的一种或者多种。