[发明专利]一种基因构建重组质粒pEGFP-GRE-GP5gB及应用

说明书

本发明涉及一种PRRSV GP5片段、表位预测序列GRE及PRV gB基因三联表位基因重组真核表达质粒pEGFP‑GRE‑GP5gB，其构建步骤如下：⑴GRE基因序列的设计与合成，PRV gB基因的偏好性密码子优化；⑵构建重组穿梭载体pEGFP‑GRE‑GP5gB；⑶在Marc145及PK15细胞中转染重组质粒pEGFP‑GRE‑GP5gB，能表达目的蛋白，即得重组真核表达质粒pEGFP‑GRE‑GP5gB。本发明旨在构建可以预防针对多株PRRSV，同时可以预防PRV的重组真核质粒，为畜牧业两种疾病的防治提供一定的试验依据。

技术领域

本发明属于基因生物工程技术领域，尤其是一种PRRSV GP5片段、表位预测序列GRE 及PRV gB基因三联表位基因重组真核表达质粒pEGFP-GRE-GP5gB及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)一直困扰着我国养猪业的健康发展。PRRSV是畜牧业中广泛发生的一种猪病毒病，隐性感染亦可造成免疫抑制从而引起继发感染。猪繁殖与呼吸障碍综合征PRRS破坏生猪免疫系统的完整性，进而引起其他疾病继发感染，猪伪狂犬PR能够引起妊娠母猪流产、死胎，初生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞、公猪不育等症状，亦是危害全球养猪业的重大传染病之一。

PRRSV变异性较大，传统疫苗作用不甚理想。表位疫苗具有安全性好、保护力强和应答类型可调控等优点，可以通过在细胞内持续表达抗原的表位多肽，从而激活体内的特异性免疫细胞。GP5蛋白是一种是糖基化的囊膜蛋白，含有多个抗原表位，gB蛋白是PRV中最保守的蛋白，能介导病毒在细胞间的传播，诱导动物体内产生补体依赖和补体非依赖两种中和抗体。

目前，畜牧业上能够预防多株PRRSV的基因工程疫苗尚未见报道。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种PRRSV GP5片段、表位预测序列GRE及PRV gB基因三联表位基因重组真核表达质粒pEGFP-GRE-GP5gB及其应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种PRRSV GP5片段、表位预测序列GRE及PRV gB基因三联表位基因重组真核表达质粒pEGFP-GRE-GP5gB，其构建步骤如下：

⑴GRE基因序列的设计与合成，PRV gB基因的偏好性密码子优化；

⑵构建重组穿梭载体pEGFP-GRE-GP5gB；

⑶在Marc145及PK15细胞中转染重组质粒pEGFP-GRE-GP5gB，能表达目的蛋白，即得重组真核表达质粒pEGFP-GRE-GP5gB。

而且，其构建步骤如下：

⑴生物信息学分析并筛选出PRRSV GP5蛋白序列的保守区域，获得具备免疫原性的 PRRSV GP5重组表位基因序列，优化获得适合哺乳动物细胞表达的GRE基因序列；

⑵GRE-GP5gB基因的PCR扩增：以SEQ ID NO.3序列、SEQ ID NO.6序列扩增SEQ IDNO.11：GRE-GP5gB基因序列；

⑶重组真核表达质粒pEGFP-GRE-GP5gB，转染Marc145及PK15细胞能表达目的蛋白，即得重组真核表达质粒pEGFP-GRE-GP5gB。

而且，其构建步骤如下：