[发明专利]一种利用生物酶法提取黑木耳多糖的方法

权利要求书

1.一种利用生物酶法提取黑木耳多糖的方法，其特征在于所述方法为：

（1）将黑木耳粉溶解于去离子水中，25 ℃溶胀8~16 h，然后在-20 ℃冰箱中冷冻50~70min，20 ℃恒温水浴锅中解冻，进行2~4次冻融循环，获得预处理后的黑木耳粉；所述黑木耳粉是将黑木耳粉碎过150-200目筛；所述去离子水体积用量以黑木耳粉重量计为28~32 mL/g；（2）将 预处理后的黑木耳粉加入去离子水中，加入纤维素酶与木瓜蛋白酶，在45-80℃、pH4.0-8.0条件下提取1-5 h；所述去离子水用量以黑木耳粉重量计为30~70 mL/g；所述纤维素酶与黑木耳粉重量比为0.06~0.12 : 1；所述木瓜蛋白酶与黑木耳粉重量比为0.04~0.12 : 1；（3）再加入β-葡聚糖酶或甘露聚糖酶或中性蛋白酶中的一种，在45-80℃、pH2.0-9.0条件下提取1-5 h；所述β-葡聚糖酶与黑木耳粉重量比为0.04~0.12 : 1；所述甘露聚糖酶与黑木耳粉重量比为0.01~0.12 : 1；所述中性蛋白酶与黑木耳粉重量比为0.04~0.12 :1；（4）然后加热至沸15 min灭酶，离心，取上清液，加入2-6倍体积的95%乙醇，4 ℃静置10 h后，离心；（5）取沉淀，溶解于2-7倍体积去离子水中后，采用Sevage法脱蛋白至上层280 nm没有吸收峰，浓缩至原体积的1/3，冷冻干燥，获得黑木耳多糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（2）提取条件为：55℃、pH 5.3条件下提取3.0 h。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（3）加入β-葡聚糖酶的提取条件为：55℃、pH 5.3条件下提取2 h；加入甘露聚糖酶的提取条件为：70℃、pH 2.8条件下提取2 h；加入中性蛋白酶的提取条件为：50℃、pH 9.0条件下提取2 h。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（5）所述Sevage法脱蛋白按如下步骤进行：将沉淀溶于去离子水后，置于分液漏斗中，加入Sevage试剂，上下剧烈振荡2 min后，静置分层，取上层，在280 nm处检测是否有吸收峰，继续用Sevage试剂洗脱至上层在280 nm没有吸收峰；Sevage试剂为体积比4:1的氯仿：正丁醇；所述Sevage试剂每次加入量为去离子水体积的1/4。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（5）冷冻干燥条件为初始温度为-30℃，真空度为80 Pa。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素酶活力50 U/mg，木瓜蛋白酶活力10 U/mg，β-葡聚糖酶活力50 U/mg。