[发明专利]牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗的制备及其应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。该疫苗包含活的牛病毒性腹泻病毒NMM株和牛传染性鼻气管炎病毒JSM株。制备该疫苗的步骤包括，1）两种有效毒株的获得和致弱培养；2）MDBK细胞悬浮培养分别制备病毒抗原；3）以滴度为10^4.7TCID₅₀的浓度进行配比、分装，添加20%的冻干保护剂后冷冻干燥。所制备牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗病毒滴度在10^3.5TCID₅₀的浓度下可获得病毒滴度分别为10^7.3TCID₅₀和10^7.8TCID₅₀的灭活疫苗同样的免疫效果，超剂量接种安全性评价及效力试验评价结果显示，本发明所述牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗具有低成本、高功效及接种安全的特点。

技术领域

本发明属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域，具体地说，涉及一种牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

牛病毒性腹泻/黏膜病（Bovine viral diarrhea/Mucosal Disease，BVD/MD）是由病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)引起的，临床表现为腹泻、发热、白细胞减少、黏膜糜烂溃疡、腹泻或咳嗽为主要特征的一种传染病，可使牛出现BVDV持续性感染，多数持续性感染动物外观健康，但生产性能下降，且成为重要的传染源，对我国养殖业威胁较大，并造成了严重的经济损失，是危害养牛业的重要病原之一，该病最早于1946年发现于美国，后呈爆发式全球流行。上个世纪80年代该病在我国即有流行的报道，血清学调查表明我国BVDV平均感染率为56.5%，其中阳性率最高的省份高达84.9%，最低为5.2%，该病流行范围几乎已经遍布我国各地，给我国养牛业造成了巨大的危害和经济损失。农业部发布的第96号公告，将牛病毒性腹泻定义为三类疫病。世界动物卫生组织（OIE）列为必须上报疫病。

牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotracheitis，IBR）是由牛疱疹病毒I型（BHV-I）病毒引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病，表现为上呼吸道及气管黏膜发炎、呼吸困难、流鼻涕及流泪等症状，还可引起生殖系统损害 , 继发性的细菌感染能导致更严重的呼吸道疾病。本病可表现为多种类型，包括呼吸道型、生殖道感染型、脑膜炎型和眼炎型。本病给养牛业造成较大的经济损失。它可延缓育肥牛的成长和增重；小牛感染后出现脑炎等症状 , 有时也发生眼结膜炎和角膜炎。乳牛患病后，产乳量大减，甚至完全停止产乳。该病于二十世纪50年代初最早见于美国，目前世界范围内流行。我国于1980年首次从新西兰进口种牛中发现此病，目前在大部分省份的奶牛、地方黄牛和水牛均有IBRV感染。血清流行病学调查研究表明，我国牛传染性鼻气管炎血清阳性率从3%～70%不等，平均阳性率达到38%。在病原学研究进展，近些年来从多个地区分离到了IBRV，感染牛场的奶牛产奶量下降，死淘率增加，造成了巨大的经济损失。随着我国养牛业的发展，该病对我国奶牛业和肉牛业的影响越来越大。

目前，预防牛病毒性腹泻/黏膜病和牛传染性鼻气管炎多采用疫苗接种，商品化疫苗主要是弱毒活疫苗和灭活疫苗，二者各有优缺点。灭活疫苗诱导产生的免疫反应持续时间较短，需要多次接种，且不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应。目前我国商品化的疫苗很少，养牛业面临着巨大的威胁，进口疫苗价格昂贵，疫情发生时无法快速获得。在临床研究中发现，BVDV和IBRV往往混合感染。因此国内急需研制牛病毒性腹泻/粘膜病、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗，以达到一针防两病，提高免疫效果，节省劳动力，降低成本的目的。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提出了一种利用MDBK细胞悬浮生产牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联活疫苗的方法。