[发明专利]一种牙髓干细胞大规模常温消化方法有效
| 申请号： | 202011106786.7 | 申请日： | 2020-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN112251401B | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 叶青松;郑丽娜;杨多佳;贺捷;陈以列;夏蒙婷;贺燕 | 申请（专利权）人： | 浙江优牙生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237 | 代理人： | 王宏雷 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市高新技术产*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 牙髓 干细胞 大规模 常温 消化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种牙髓干细胞大规模常温消化方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）从培养箱中取出具有牙髓干细胞的培养瓶喷酒精后放至生物安全柜；
（2）倒液弃培养基上清液；
（3）加入DPBS清洗培养瓶并倒液弃除，弃除重组胰酶采用浸润后倒液弃除的方式；
（4）加入重组胰酶，加入的重组胰酶的量为1-5ml，温和摇动培养瓶使重组胰酶浸润细胞后立即弃除重组胰酶；
（5）放倒培养瓶在生物安全柜台面上，常温消化至大部分细胞开始皱缩、细胞边界明显时，轻轻拍打培养瓶细胞面，常温消化至大部分细胞开始皱缩、细胞边界明显的时间为60-180s；
（6）倒入培养基终止消化；
（7）水平方向前后摇晃培养瓶使细胞从培养瓶上脱落，倒液转移至储液瓶，用移液管吹打细胞悬液至单细胞，即完成消化。
2.根据权利要求1所述的一种牙髓干细胞大规模常温消化方法，其特征在于，所述的培养瓶内的牙髓干细胞为传代的牙髓干细胞。
3.根据权利要求1所述的一种牙髓干细胞大规模常温消化方法，其特征在于，所述的步骤（3）中加入DPBS的量为2-10ml。
4.根据权利要求1所述的一种牙髓干细胞大规模常温消化方法，其特征在于，所述步骤（6）中加入的培养基为5-10ml。
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