[发明专利]一种干细胞妊娠纹修复方法

权利要求书

1.一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：制备脐带间充质干细胞细胞因子上清液；

S2：取S1中的部分脐带，剪切成若干小段，然后用无菌PBS清洗，直至肉眼不可见血丝；

S3：将S2中的清洗完成后的小段脐带剪碎移入细胞培养皿中，使用含胎牛血清的α-MEM完全培养基培养，待显微镜下细胞铺满培养皿面积的80%时，加入胰蛋白酶消化传代；

S4：当S3中细胞传至第3代对数生长期时，将部分细胞传代至干细胞无血清培养基中培养，培养后通过离心机采用低速离心法获得干细胞无血清培养基上清，然后向干细胞无血清培养基上清中加入连接纤维蛋白，混合即可得到辅助修复溶液备用；

S5：制备脂肪间充质干细胞因子上清液；

S6：将辅助修复溶液、脐带间充质干细胞细胞因子上清液、脂肪间充质干细胞因子上清液、阿拉伯半乳聚糖、葡萄糖酸锌、葡萄糖酸铜、抗坏血酸钠按比例15-20：20-30：10-15：1-3：1-2：1-2：0.1-2均匀混合得到修复产品。

2.根据权利要求1所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：所述脐带间充质干细胞细胞因子上清液制备方法，用组织保护液清洗脐带组织表面血液，去除表皮和血管组织，取出华通胶清洗后剪成5-20块状，平铺在培养皿内。

3.根据权利要求2所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：沿培养皿的边缘慢慢加入间充质干细胞专用培养液至组织淹没即可；将培养皿放进CO₂浓度为5%的37℃培养箱进行培养，培养至第3-7天；继续添加培养液9-11天，之后每1-3天进行一次换液。

4.根据权利要求3所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：当培养皿内的细胞融合度达到50%-70%时，往培养皿内加热消化酶，使得组织脱离培养皿，将组织种于康宁T175培养瓶中，加入30ml培养液继续培养3-4天，待细胞融合度达到90%时，收集上清液，并对上清液进行离心，去除细胞碎片；离心后的上清液加入15ml的超滤管中进行浓缩，去除多余水分使体积浓缩为原体积的一半，浓缩液过0.22μm滤膜除菌，得到脐带间充质干细胞细胞因子上清液。

5.根据权利要求2所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：所述组织保护液为生理盐水添加25ug/ml的硫酸庆大霉素和5ug/ml的两性霉素B配制。

6.根据权利要求4所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：所述离心速率为3000转/分钟；离心时间为20分钟。

7.根据权利要求1所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：脂肪间充质干细胞因子上清液的制备方法，将脂肪颗粒在900-1200r/min的条件下离心4-8min，分别留取上层脂肪组织和下层细胞A，向脂肪组织中加入质量浓度为0.1％的胶原酶，放入37℃水浴摇床中消化25-35min，然后1800-2200r/min离心4-8min，留取下层细胞B；将下层细胞A和下层细胞B混匀，重悬，再以1800-2200r/min离心4-8min，采用无血清成分培养基重悬细胞后，接种至六孔板培养40-50小时，每三天进行一次换液，培养至20-24天。

8.根据权利要求7所述的一种干细胞妊娠纹修复方法，其特征在于：对培养20-24天后混合细胞群进行鉴定，将鉴定为脂肪间充质干细胞的细胞群进行混合传代培养，细胞数量达到3×10⁷时，采用无血清培养体系和细胞工厂进行扩大培养，培养3-4天,收集得到脂肪间充质干细胞因子上清液。