[发明专利]一种抗SARS-COV-2病毒N蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗SARS‑COV‑2病毒N蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用，属于生物技术领域。一种抗SARS‑COV‑2病毒N蛋白的纳米抗体，其包含有由SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR2以及SEQ ID NO：3所示的CDR3；本发明提供了一种抗SARS‑COV‑2病毒N蛋白的纳米抗体，重组表达的新型冠状病毒N蛋白筛选噬菌体展示纳米抗体库，筛选出来特异性结合N蛋白的纳米抗体，该抗体与人源Fc蛋白融合表达后，仍保持对抗原的识别能力，该抗体与Fc蛋白融合表达后，可以用作新冠抗体检测试剂盒的质控抗体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗SARS-COV-2病毒N蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术

冠状病毒隶属于冠状病毒科、冠状病毒属，是一类单链正义RNA病毒；自1937年发现首个病毒至今，共鉴定多种冠状病毒，分属于α、β、γ和δ属，其中有7种冠状病毒能感染人，分别为α属的HCoV-229E、HCoV-NL63和β属的HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV及2019年底鉴定的新型冠状病毒SARS-CoV-2。

SARS-CoV-2的基因组与2003年导致SARS流行的冠状病毒基因组相似。对SARS-CoV-2蛋白的理解，大部分是基于前期对SARS的研究结果；SARS-CoV的蛋白质由两种多聚蛋白组成：ORF1a和ORF1ab蛋白质水解后形成16非结构蛋白，四种结构蛋白：突刺蛋白(S)，包膜(E)、膜(M)和核衣壳(N)，以及八种辅助蛋白：ORF3a，ORF3b、ORF6、ORF7a、ORF7b、ORF8a，ORF8b和ORF9b。虽然被认为是辅助蛋白对病毒复制来说不是必须的，但在病毒与宿主的相互作用起重要作用。

冠状病毒的核衣壳蛋白是一种在感染过程中大量表达的结构蛋白，病毒感染细胞后，N蛋白与RNA一起进入细胞，参与病毒的复制、组装和释放；SARS-CoV N蛋白含有两个RNA结合结构域构成，分别是N端的NTD和C端的CTD，中间由富含丝氨酸和精氨酸的结构域连接；新型冠状病毒抗原N蛋白具有较强的免疫原性，是新冠抗体检测试剂盒和抗原检测试剂盒的重要检测靶标，从而开发一种高灵敏度的新冠抗原检测的方法及用到的质控抗体十分重要。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中需要进一步提高高灵敏度检测新冠抗原以及开发其用到的质控抗体的问题，而提出的一种抗SARS-COV-2病毒N蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种抗SARS-COV-2病毒N蛋白的纳米抗体，其包含有由SEQ ID NO:1所示的CDR1、SEQ ID NO:2所示的CDR2以及SEQ ID NO：3所示的CDR3。

一种抗SARS-COV-2病毒N蛋白的纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

一种抗SARS-COV-2病毒N蛋白的纳米抗体，其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

一种编码如权利要求1所述的纳米抗体基因。

一种如权利要求1所述的纳米抗体制备方法。

优选的，主要包括以下步骤：

S1、纳米抗体库的构建；

S2、拯救噬菌体表面展示纳米抗体库；

S3、淘选纳米抗体；

S4、淘选识别目的蛋白的纳米抗体；

S5、挑选识N蛋白的阳性克隆。

一种重组构建体，采用权利要求1所述的纳米抗体与Fc蛋白融合表达。

一种如权利要求7所述的重组构建体制备方法，包括以下步骤，