[发明专利]粘质沙雷氏菌和桔橙链霉菌CGMCC4.6285的组合在制备生物农药中的应用

权利要求书

1.一种生物农药的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）先将粘质沙雷氏菌培养得到发酵液Ⅰ，后处理，制成菌粉；将桔橙链霉菌CGMCC4.6285培养得到含有厚垣孢子的发酵液Ⅱ，备用；

（2）再将新鲜黄秋葵压榨得到黄秋葵汁，接着边搅拌边将步骤（1）所得菌粉加入黄秋葵汁中，搅拌分散均匀，得到混合物A；

（3）然后边搅拌边将混合物A、麦麸依次加入步骤（1）所得发酵液Ⅱ中，投料完毕后静置30～40分钟，干燥制成混合物B，最后将混合物B与羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉和可溶性淀粉混合均匀，挤压造粒，即得所述的一种生物农药；

步骤（2）中，菌粉与黄秋葵汁的质量比为1：2～3，所述黄秋葵汁的制备方法如下：先将新鲜黄秋葵洗净后进行压榨，然后利用匀质机充分滚压，直至无团粒胶状物即可；

步骤（3）中，混合物A、麦麸、发酵液Ⅱ的质量比为1：6～9：5～8；混合物B与羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉和可溶性淀粉的质量比为10：0.05～0.07：0.4～0.6：0.6～0.8：0.6～0.8。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，菌粉的制备方法如下：先将粘质沙雷氏菌活化后接种于种子培养基中，28～32℃培养12～18小时，得菌株种子液；然后取菌株种子液接种于发酵培养基中，28～32℃、180～200rpm/min振荡发酵培养，离心，收集上清液，即为发酵液Ⅰ，后处理，制成菌粉。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，利用LB培养基进行活化处理，具体方法是：将粘质沙雷氏菌从保藏菌种的试管斜面中取出转移至LB培养基上，接种量为体积百分数2～3%，28℃恒温箱中倒置培养24～72小时即可；菌株种子液在发酵培养基中的接种量为体积百分数4～6%。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，种子培养基的配方为：胰蛋白胨8～12g，酪蛋白胨8～10g，可溶性淀粉6～9g，6波美麦芽汁400～500mL，海水晶3～5g，醋酸铵2～4g，FeSO₄ 0.2～0.3g，CaCl₂ 3～4g，蒸馏水900～1100mL，pH=6.8～7.2，121℃灭菌20～30分钟；发酵培养基的配方为：酵母浸膏4～6g，蔗糖0.4～0.5g，MgSO₄·7H₂O 5～8g，NaNO₃ 5～8g，KCl 8～12g，蒸馏水900～1100mL，pH=6.8～7.2，121℃灭菌20～30分钟。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，发酵液Ⅱ的制备方法如下：先将桔橙链霉菌CGMCC4.6285接种于PDA培养基，27～29℃培养6～7天，产生分生孢子，然后用接种环将分生孢子转移到含无菌水的试管中，搅拌使得分生孢子从菌丝上分散下来，用无菌纱布过滤除去菌丝，将孢子浓度调节至10⁶～10⁷cfu/mL，按照1～2%接种量接种到液体培养基中，27～29℃发酵培养2～3天，即得含有厚垣孢子的发酵液Ⅱ。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，干燥的工艺条件为：35～37℃干燥8～12小时。