[发明专利]基于SARS-CoV-2 S蛋白RBD区域的靶向性外泌体及其制备方法有效
| 申请号： | 202011097744.1 | 申请日： | 2020-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN112226413B | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 熊思东;傅煜轩 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;A61K47/46;A61K47/42;A61K45/00;A61P31/14 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 215000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 sars cov 蛋白 rbd 区域 靶向 性外泌体 及其 制备 方法 | ||
1.一种基于SARS-CoV-2 S蛋白RBD区域的靶向性外泌体，其特征在于，所述的靶向性外泌体上表达RBD-VSVG融合蛋白，所述的RBD-VSVG融合蛋白为SARS-CoV-2 S蛋白的RBD替换VSVG的胞外区域得到。
2.根据权利要求1所述的靶向性外泌体，其特征在于，所述的RBD-VSVG融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求2所述的靶向性外泌体，其特征在于，所述的RBD-VSVG融合蛋白的氮端设有信号肽。
4.根据权利要求3所述的靶向性外泌体，其特征在于，所述的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种权利要求1-4任一项所述的靶向性外泌体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、以含有SARS-CoV-2的样本cDNA为模板，PCR扩增获得RBD片段；
S2、体外合成VSVG的跨膜区及胞内区全长基因片段；
S3、将S1步骤的RBD片段和S2步骤的VSVG的跨膜区及胞内区全长基因片段连接到载体上得到表达载体；
S4、将S3步骤的表达载体转入宿主细胞中，培养后收集细胞培养上清，分离得到所述的靶向性外泌体。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的宿主细胞为293T细胞或树突状细胞。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的载体是pCMV载体。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的分离包括如下步骤：将细胞培养上清在8000-15000g离心20-40min取上清液，将上清液经过微米膜过滤后在80000-120000g超速离心60-80min，取沉淀，将沉淀采用缓冲溶液重悬，再在80000-120000g超速离心60-80min，去除上清，得到所述的外泌体。
9.权利要求1-4任一项所述的靶向性外泌体在制备靶向治疗COVID-19的药物中的应用，所述的应用是将特异性抗SARS-CoV-2的功能性生物分子转入到所述的靶向性外泌体中，得到所述的靶向治疗COVID-19的药物。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的功能性生物分子为小干扰RNA、抗体或小分子药物。
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