[发明专利]一种基于水凝胶释放机制的抗生素检测方法

说明书

本发明公开了一种基于水凝胶释放机制的抗生素检测方法，包括如下步骤：(1)将氧化石墨烯固体粉末超声分散于水中，制成氧化石墨烯分散液；(2)将上述氧化石墨烯分散液与抗生素核酸适体共孵育，再加入聚乙烯醇水溶液，剧烈震荡以自组装形成水凝胶；(3)在PBS缓冲溶液中加入标准浓度的抗生素，并将其加入上述水凝胶，静置一段时间，取上清液；用紫外可见分光光度计测定该上清液的紫外吸收强度，并绘制标准曲线，获得线性方程；(4)用上述PBS缓冲溶液稀释待测样品，并将其加入上述水凝胶，静置一段时间，取上清液；用紫外可见分光光度计测定该上清液的紫外吸收强度，代入步骤(3)所得的线性方程中，经计算获得待测样品中的抗生素的浓度。

技术领域

本发明属于抗生素检测技术领域，具体涉及一种基于水凝胶释放机制的抗生素检测方法。

背景技术

抗生素的污染日益严重，我国每年生产约20万吨抗生素，而每年超过约五万吨抗生素排入河流，就河流抗生素浓度而言，我国远远大于其他国家：中国303ng/L，而意大利为9ng/L，美国为120ng/L，德国是20ng/L。抗生素的滥用，危害严重，其在环境中积累，通过食物链进入人体，复旦大学公共卫生学院近年来对上千名8-11岁儿童和516名孕妇的调查结果显示，儿童尿样中共有21种人用、兽用或人兽用抗生素检出，79.6％的学龄儿童尿液中检出一种或几种抗生素，其中部分已在临床上禁用，兽用抗生素暴露与儿童肥胖、性早熟相关。此外，有16种抗生素在江浙沪的孕妇尿液中检出，一种及以上抗生素检出率为41.6％，孕妇暴露较为普遍，风险较大。另外，抗生素的大量使用，亦会诱导产生耐药基因，严重危害人类的生存环境。世界卫生组织WTO称，目前“不能被药物杀死的细菌(即抗生素)”已经是“当今对全球健康，粮食安全和发展的最大威胁之一”。因此，急需开发一种简单、快速、准确、高效用于检测抗生素的方法，这对于环境的监测意义重大。

传统的检测抗生素的方法有微生物法，仪器分析法，免疫分析法等，传统的检测抗生素的方法缺点明显：例如微生物法耗时长、灵敏度低、选择性不高；仪器分析法中例如液相色谱法仪器复杂，检测时间长；而作为免疫分析法，它的缺点是：免疫周期长，理想抗体不易获得。传统的检测方法因其固有的缺陷，已经不能满足当今对于环境中抗生素检测的需求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种基于水凝胶释放机制的抗生素检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种基于水凝胶释放机制的抗生素检测方法，包括如下步骤：

(1)将氧化石墨烯固体粉末超声分散于水中，制成氧化石墨烯分散液；

(2)将上述氧化石墨烯分散液与抗生素核酸适体于0-30℃共孵育2-10h，再加入聚乙烯醇水溶液，剧烈震荡以自组装形成水凝胶；

(3)在pH＝6.8-7.2的PBS缓冲溶液中加入标准浓度的抗生素，然后将上述水凝胶浸泡其中10-60min，取上清液；用紫外可见分光光度计在260nm的吸收波长下测定该上清液的紫外吸收强度，并绘制标准曲线，获得线性方程；

(4)用上述pH＝6.8-7.2的PBS缓冲溶液稀释待测样品，然后将上述水凝胶浸泡其中10-60min，取上清液；用紫外可见分光光度计在260nm的吸收波长下测定该上清液的紫外吸收强度，代入步骤(3)所得的线性方程中，经计算获得待测样品中的抗生素的浓度。

在本发明的一个优选实施方案中，所述氧化石墨烯粉末用改良Hummers法制备。

在本发明的一个优选实施方案中，所述氧化石墨烯分散液的浓度为4-6mg/mL。

在本发明的一个优选实施方案中，所述抗生素核酸适体在所述氧化石墨烯分散液中的量为0.5-1OD。

在本发明的一个优选实施方案中，在本发明的一个优选实施方案中，所述聚乙烯醇水溶液的浓度为8-11mg/mL。