[发明专利]一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及应用

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体公开了一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及制备方法与应用。所述抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体为杂交瘤细胞株5A9分泌的单克隆抗体；所述的杂交瘤细胞株5A9由猪流行性腹泻病毒nsp13重组蛋白免疫原多次免疫小鼠而得到；所述的杂交瘤细胞株5A9于2020年09月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，细胞株保藏编号为CCTCC NO:C2020148；所述免疫原，由重组表达载体转化入E.coli BL21感受态中进行诱导表达而得到；所述的重组表达载体包含一对扩增nsp13基因全长的引物，所述nsp13基因的核苷酸序列组成如SEQ ID NO.2所示。本发明所提供的抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体，可制备成猪流行性腹泻病毒nsp13的WesternBlot检测试剂等。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及制备方法与应用。

背景技术

猪流行性腹泻于1971年首次在英国报道并将其病原体命名为“猪流行性腹泻病毒”，中国在1976第一次报道了此病。猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus，PEDV)引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病，以水样腹泻、呕吐和脱水为主要症状，各年龄阶段的猪均易感。哺乳仔猪、断奶仔猪和育肥猪的发病率可达100％，成年母猪发病率约为15％-20％，哺乳仔猪群受害最为严重，病死率平均50％左右。猪流行性腹泻病毒属于冠状病毒，基因组全长约为28kb，为有囊膜、不分节段的单股正链RNA病毒，PEDV病毒全基因组从5’-3’基因结构依次为5’端非编码区(Untranslatedregion， UTR)、16个非结构蛋白(nonstructural protein，nsp)、纤突(Spike，S) 蛋白、开放性阅读框(Open reading frame，ORF)3、小膜(Envelope,E)蛋白、膜(Membrane,M)蛋白、核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白、3’端非编码区(Untranslated region，UTR)。基因组编码两个复制酶多聚蛋白，ORF1a编码多聚蛋白1a(PP1a)，ORF1b编码多聚蛋白1ab(PP1ab)。在病毒自身编码的蛋白水解酶的作用下，复制酶多聚蛋白PP1a和PP1ab裂解产生了16个功能性成熟的nsp，分别是nsp1-nsp16，这些非结构蛋白主要是在病毒的侵染和复制的过程当中表达，在调节病毒基因组RNA的复制和亚基因组RNA的转录方面发挥了重要作用。nsp13是核酸解旋酶，是解旋酶超家族I的成员之一。解旋酶具有解开RNA 和DNA双螺旋的特性，能够水解NTP释放能量。nsp13作为冠状病毒保守蛋白，也是最具有潜力作为靶标设计抗病毒药物，但对PEDV nsp13在病毒感染时结构与功能的研究尚未见到相关报道，因为目前缺乏抗nsp13检测抗体。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有目前无猪流行性腹泻病毒nsp13功能研究的公开与应用的相关报道等不足，提供一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体及其制备方法与应用。本发明所提供的抗猪流行性腹泻病毒 nsp13单克隆抗体，该抗体可运用于PEDV感染情况下Western Blot检测nsp13。

本发明采用如下技术方案，来实现发明目的。

首先，本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体。所述的一种抗猪流行性腹泻病毒nsp13蛋白的单克隆抗体为杂交瘤细胞株5A9所分泌；所述的杂交瘤细胞株5A9由猪流行性腹泻病毒重组nsp13蛋白免疫原多次免疫小鼠而得到；所述的杂交瘤细胞株5A9于2020年09月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏编号为CCTCC NO:C2020148。

进一步地，所述的猪流行性腹泻病毒重组nsp13蛋白免疫原，由重组表达载体转化入E.coli BL21感受态中进行诱导表达而得到；所述重组nsp13蛋白免疫原的氨基酸序列组成如SEQ ID NO.1所示。