[发明专利]一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法

说明书

本发明一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法，所述快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法，包括以下步骤：步骤一、捕获探针与固相载体的连接。此处所说的固相载体包括但不限于磁微粒，聚苯乙烯表面，多聚赖氨酸表面，羧基修饰表面。此处所说的连接包括通过非特异性的吸附和共价偶联；步骤二、探针与显色微球的偶联。此处所说的显色微球包括但不限于各种颜色的荧光微球，有色微球等；步骤三、反应卡中的检测反应和信号的读取。与现有技术相比的优点在于：本发明可以在30分钟内检测RNA或DNA，灵敏度达到1000copies/样本，且可以在现场检测，不需要中心实验室，可以为检测会引起突发性公共卫生事件的病原体提供工具。

技术领域

本发明涉及单链核酸检测技术领域，具体是指一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法。

背景技术

在应对突发性的传染病公共卫生事件时，及时快速的病原体检测对控制传染病的暴发比较重要。2020年初开始，在世界范围内暴发的新型冠状病毒(COVID-19)，急需要快速准确的检检测方法。新冠病毒检测的标准方法是使用呼吸道分泌物或血样作为样本，用实时RT-PCR，恒温扩增，或基因组测序的方法检测。实时RT-PCR测试核酸的特异性比较高，但临床表现的灵敏度较低，约为30％，常常需要多次检测才能确诊或排除病毒的感染。另外，RT-PCR需要将样本送到中心实验室做测试，从取样本到出结果需要至少6个小时。使用胶体金免疫层析和酶联免疫实验(ELISA)等血清学方法可以检测血清IgM和IgG浓度，IgM浓度能反映当前的感染情况，但其敏感性和特异性较低。因此需要提供一种更好的方法，在保证灵敏度和特异度的情况下，检测结果需要在30分钟内出来，以满足临床和疾病防控的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服以上技术困难，提供一种能够克服RT-PCR法检测时间较长且对环境要求较高和胶体金免疫层析灵敏度和特异度较低的缺陷的一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法，所述快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法，包括以下步骤：

步骤一、捕获探针与固相载体的连接。此处所说的固相载体包括但不限于磁微粒，聚苯乙烯表面，多聚赖氨酸表面，羧基修饰表面。此处所说的连接包括通过非特异性的吸附和共价偶联；

步骤二、探针与显色微球的偶联。此处所说的显色微球包括但不限于各种颜色的荧光微球，有色微球，稀土元素微球，量子点等；

步骤三、捕获组份和显色组份的预混合；

步骤四、反应卡中的检测反应和信号的读取。

进一步的，所述快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法，包括以下具体实验步骤：

步骤一、准备实验组分及实验用具：

1、捕获探针与固相载体的连接，捕获探针与磁微粒的共价偶联；

2、探针与显色微球的偶联，显色探针与荧光微球的连接；

3、反应液；

4、反应管；

5、读数设备：荧光显微镜。

步骤二、进行具体的实验操作。

本发明与现有技术相比的优点在于：本发明的一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法，取得的有益效果如下：可以在30分钟内检测RNA或DNA，灵敏度达到1000copies/样本，且可以在现场检测，不需要中心实验室，可以为检测会引起突发性公共卫生事件的病原体提供工具。

附图说明

图1是本发明一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法的结构示意图一。

图2是本发明一种快速检测单链核酸的薄层荧光聚焦方法的结构示意图二。