[发明专利]一种检测牛早期怀孕的方法

权利要求书

1.一种检测牛早期怀孕的方法，其特征在于，包括以下步骤：先收集待测样品，采用牛促绒毛膜性腺激素HCG检测试剂条对待测样品进行检测，将检测结果与试剂盒的比色卡进行比对，再判断检测结果。

2.根据权利要求1所述的一种检测牛早期怀孕的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)样品采集：在母牛配种后的第7～14d，收集母牛的晨尿2～8mL；

(2)检测：将牛促绒毛膜性腺激素HCG检测试剂条插入步骤(1)的尿液中6～9s，取出，静置13～15min，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T的显色情况，放置15min后结果无效；

(3)结果判断：根据步骤(2)检测试纸显色结果：若试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，重新检测；若试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促绒毛膜性腺激素HCG水平低下，隔日进行检测；若试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与HCG比色卡进行下列对比；

①当促绒毛膜性腺激素HCG＜10mIU/mL，表明母牛未怀孕；

②当当促绒毛膜性腺激素HCG≥10mIU/mL，表明母牛可能怀孕，连续测试两次，每隔一天测试一次；

③当步骤②的两次检测试结果的促绒毛膜性腺激素HCG上升，且后一次的促绒毛膜性腺激素HCG是前一次的1～2倍，表明母牛怀孕，且为活胎；

④当步骤②的两次检测结果的HCG维持不变或下降，表明母牛怀孕，但胚胎停育，及时采取保胎措施或停止妊。

3.根据权利要求1或2所述的一种检测牛早期怀孕的方法，其特征在于：所述牛促绒毛膜性腺激素HCG检测试剂条的制备方法，包括以下步骤：

(一)将NC膜贴在PVC板上表面的中部作为底板，用XYZ3010喷金划膜仪，并按0.7μL/cm的量、300mm/s的速度将IgG包被液均匀地划在NC膜的上端作为质控线C，将HCG包被液均匀地划在NC膜的下端作为检测线T，质控线C与检测线T相距5～7mm，质控线C距离NC膜上端7～9mm，检测线T距离NC膜下端6～8mm，然后放入干燥箱内，于温度为24～26℃、湿度为20～30％下干燥19～21h，制得划膜板；

(二)在100mL金溶液中加入1.15～1.2mL碳酸钾溶液、1.6～1.8mgLHmb²，搅拌30～35min，滴加320～325uL封闭液，搅拌10～15min，于4℃、1200r/min的条件下离心25～30min，直至上清液变为水，弃上清液，取余液5.2～5.4mL，加入38～42mL胶体金结合物稀释液混匀，均匀铺在1080cm²玻璃纤维素膜RB65上，然后放入干燥箱内，得金垫；

(三)按30mL/张的量，将样本垫处理液均匀铺在玻璃纤维素膜SB06上，然后放入干燥箱内，于温度为24～26℃、湿度为20～30％下干燥19～21h，得样本垫；

(四)将步骤(二)的金垫贴于步骤(一)的划膜板的NC膜下端，并使1～2mm的金垫后端搭在NC膜上，然后将步骤(三)的样本垫贴于金垫前端上面，并使样本垫后端完全搭在金垫上，样本垫前端贴于PVC板前端，再将吸水垫贴于PVC板后端，并使1～2mm的吸水垫前端搭在NC膜后端获得贴板，最后将贴板切割成2.8～3.3mm的试纸条，得牛促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸。

4.根据权利要求3所述的一种检测牛早期怀孕的方法，其特征在于：所述IgG包被液按照以下方法制备：将羊抗鼠IgG抗体100mg、质量浓度为1％的海藻糖溶液1mL溶解在0.01MPBS缓冲液100mL中，混合均匀，制得所述IgG包被液。

5.根据权利要求3所述的一种检测牛早期怀孕的方法，其特征在于：所述HCG包被液按照以下方法制备：将160～180mg牛的促绒毛膜性腺激素单克隆α亚级抗体HCGmAbCoating、质量浓度为1％的海藻糖溶液1mL溶解在0.01MPBS缓冲液100mL中，混合均匀，制得所述HCG包被液。