[发明专利]一种表达免疫抑制检查点受体分子的T细胞及其应用

说明书

本发明提供了一种表达免疫抑制检查点受体分子的T细胞及其应用，所述免疫抑制检查点受体分子嵌合表达于T细胞膜上，包括免疫抑制检查点和免疫激活信号结构域；所述免疫抑制检查点为所述免疫抑制检查点受体分子的信号肽、胞外结构域和跨膜结构域；所述免疫激活信号结构域包括CD28胞内段、CD3ζ和TLR2的组合；所述CD28位于所述CD3ζ的N端，所述TLR2位于所述CD3ζ的C端。本发明的T细胞相较于野生型T细胞具有显著增强的抗免疫抑制作用，对表达免疫抑制检查点配体的肿瘤细胞具有强烈的杀伤作用，不会引起细胞因子风暴，安全性强，在肿瘤治疗领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种表达免疫抑制检查点受体分子的T细胞及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T cell，CAR-T)免疫疗法是一种以嵌合型抗原受体为基础的细胞免疫治疗方法，通过体外基因转移技术，将编码嵌合抗原受体(CAR)的基因序列转导入T细胞中，生成可以结合靶抗原的肿瘤特异性T细胞，是近年来治疗恶性血液肿瘤的有力手段。

然而，靶向实体瘤的CAR-T免疫治疗面临巨大的考验，CAR-T细胞存在无法突破实体瘤组织壁垒、不能抵抗肿瘤组织内的免疫抑制、在缺氧微环境中竞争生存能力弱等问题。

科研人员通过构建PD-1抗体(Pembrolizumab、Nivolumab)或CTLA-4抗体(Ipilimumab)，或使用PD-1或CTLA-4的抑制剂或信号通路阻断剂，进行肿瘤免疫治疗。但是，抗体需要渗入肿瘤组织中才能发挥疗效，PD-1抗体和CTLA-4抗体的临床应用存在不确定性。

现有技术还报道了共表达双抗体PD-1和CD19/Mesothelin/PSCA的CAR-T，虽然可以靶向表达PD-1或CD19/Mesothelin/PSCA或同时表达两者的肿瘤细胞，但是可能引起细胞因子风暴，误伤正常细胞。

因此，有必要对现有技术进行改进，构建更加合理的嵌合受体分子，解除肿瘤免疫抑制微环境，增强肿瘤微环境中的免疫作用，缓解过度的非特异性免疫效应和细胞因子风暴等副作用。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了一种表达免疫抑制检查点受体分子的T细胞及其应用，改造后的T细胞有利于避免细胞因子风暴等副反应的发生，安全性高。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种表达免疫抑制检查点受体分子的T细胞，所述免疫抑制检查点受体分子嵌合表达于T细胞膜上，包括免疫抑制检查点和免疫激活信号结构域；

所述免疫抑制检查点为所述免疫抑制检查点受体分子的信号肽、胞外结构域和跨膜结构域；

所述免疫激活信号结构域包括CD28胞内段、CD3ζ和TLR2的组合；

所述CD28位于所述CD3ζ的N端，所述TLR2位于所述CD3ζ的C端。

本发明中，向T细胞导入将免疫抑制信号转变为免疫激活信号的功能性嵌合受体的编码基因，使得改造后的T细胞对表达免疫抑制检查点配体的肿瘤细胞具有显著增强的杀伤作用，而由于T细胞天然表达免疫抑制检查点，免疫抑制检查点和配体结合后传递的抑制信号有利于避免T细胞过度激活，减缓了细胞因子风暴等副反应的发生几率。

进一步地，本发明采用Toll样受体2(TLR2)作为信号传递结构域，并设置在CD3ζ的C端，不仅加强了改造的T细胞特异性识别肿瘤抗原的能力，更显著扩大了由胞外区传递的细胞信号，引起下级细胞杀伤作用的级联放大，提高了T细胞的抗肿瘤能力。