[发明专利]一种鉴别人参属植物单核苷酸多态的系统以及鉴别方法

权利要求书

1.一种基于鉴别人参属植物单核苷酸多态的系统的鉴别方法，其特征在于：所述人参属植物包括西洋参和人参两种；所述系统包括用于检测DNA模板的检测单元；所述检测单元包括固定片段和LIDA混合溶液，所述固定片段的5’端固定在固相支持物上；LIDA混合溶液包括终浓度为30µM的游离片段、终浓度为30µM的特异性片段、终浓度为25 µM的检测片段、终浓度为25 µM的通用片段、连接酶反应缓冲液、终浓度为1.25 U/μL的T4 DNA连接酶；T4DNA连接酶为5 U/µL规格的TF连接酶；连接酶反应缓冲液的成分为：50 mM Tris-HCl、10 mMMgCl₂、1 mM ATP、10 mM DTT，pH值为7.5，连接酶反应缓冲液和LIDA混合溶液的体积比为1：2；LIDA混合溶液中的镁离子的终浓度为20mM；

在检测人参的SNP位点时，固定片段为：NH₂-5’-CAATTTAAG-3’；特异性片段为：5’-TCTTAAATTG-3’；检测片段为：5’-AbCACTTTC-3’-bio；通用片段为：5’-GAAAGTG-3’；游离片段为：NH₂-5’-CAATTTAAG-3’；

在检测西洋参的SNP位点时，固定片段为：NH₂-5’-CAATTTAAA-3’；特异性片段为：5’-TTTTAAATTG-3’；检测片段为：5’-AbCACTTTC-3’-bio；通用片段为：5’-GAAAGTG-3’；游离片段为：NH₂-5’-CAATTTAAA-3’其中，NH₂表示5’端氨基修饰，bio表示3’端生物素修饰，Ab表示无碱基功能团；

所述鉴别方法包括以下步骤：

（1）探针固定和模板获取：将固定片段固定在固相支持物上；从样品中获得Ⅰ类模板；

（2）连接过程：包括用于检测人参SNP位点的连接过程：使LIDA混合溶液、Ⅰ类模板与固定片段接触并进行4h的LIDA连接反应，获得第一连接产物；还包括用于检测西洋参SNP位点的连接过程；使LIDA混合溶液、Ⅰ类模板与固定片段接触并进行4h的LIDA连接反应，获得第二连接产物；

（3）检测第一连接产物的荧光信号，荧光信号的强度计为F1；检测第二连接产物的荧光信号，荧光信号的强度计为F2；当F1/F2＞2时，样品含有纯的人参；当F1/F2＜0.5时，样品含有纯的西洋参；当0.5≤F1/F2≤2时，样品含有人参和西洋参。

2.根据权利要求1所述的一种基于鉴别人参属植物单核苷酸多态的系统的鉴别方法，其特征在于：所述无碱基功能团为1’,2’-双脱氧核糖。

3.根据权利要求1所述的一种基于鉴别人参属植物单核苷酸多态的系统的鉴别方法，其特征在于：所述固相支持物为微流控生物芯片的醛基化的载玻片。