[发明专利]测定褪黑素和维生素B6

说明书

本发明提供一种高效测定单方及复方组分中褪黑素和维生素B₆的高效液相色谱分析方法，是以甲醇‑磷酸盐缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱，可避免其他组分的干扰，在13分钟内准确灵敏地检测出褪黑素和维生素B₆的含量。该方法专属性强、精密度高、稳定性较好、准确度高，操作简单，试剂与耗材价廉易得。适用于含褪黑素、维生素B₆的单方以及同时含褪黑素和维生素B₆组合物的片剂、粉末、胶囊等剂型中褪黑素和维生素B₆的质量控制，可有效地节约检测成本和时间。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种高效快速测定组方中褪黑素和维生素B₆含量的液相色谱分析方法。

背景技术

维生素B₆(分子式为C₈H₁₁NO₃.HCl)是一种水溶性维生素，又叫吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，白色或尅白色结晶或结晶性粉末，无臭，遇光渐变质，在空气中稳定；易溶于水，在乙醇中微溶，在酸性水溶中下稳定，碱性溶液中易破坏。维生素B₆在人类生长发育过程中，发挥着非常重要的生理作用，为人体内某些辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其与氨基酸代谢密切相关。

褪黑素(分子式为C₁₃N₂H₁₆O₂)又叫褪黑激素，是一种能使皮肤色素颜色变浅的激素物质，是由必需氨基酸色氨酸合成而来，白色类白色结晶粉末，易溶于甲醇，对光线敏感，对空气敏感，易氧化，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡等特性。

目前褪黑素和维生素B₆的含量测定方法包括放射免疫(RIA)法、酶联免疫(HJSA)法、紫外分光光度(UV)法、气相色谱(GC)法和气相色谱-质谱联用(GC-MS)法、高效液相色谱(HPLC)法、高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)法、毛细管电泳法、化学发光法、微生物法等。放射免疫(RIA)法、酶联免疫(HJSA)法、微生物法样品前处理相对繁琐，检测周期长；由于褪黑素的挥发性不好，采用气相色谱(GC)法和气相色谱-质谱联用(GC-MS)法检测样品前，需要对样品进行衍生化前处理，操作过程冗长，重复性差；紫外分光光度(UV)法、毛细管电泳法、化学发光法专属性较差；高效液相色谱(HPLC)法或高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)法在检测褪黑素和维生素B6较常用，但一般是一种方法检测一个组分，复方制剂就需要进行多次检测，才能得到准确结果，对人力物力造成很大浪费；而且检测过程中经常会使用离子对、三乙胺等试剂，严重影响精密仪器和色谱柱的使用寿命；因此，很有必要研究一种高效准确快速低成本且能同时测定复方组分中褪黑素和维生素B₆的液相色谱方法。

发明内容

为克服上述问题，本发明提供一种前处理简单，成本较低，准确度高，专属性强、重复性好、快捷的褪黑素和维生素B₆的高效液相色谱分析方法，所述方法包括以下步骤：

一种用于测定片剂、粉剂、胶囊剂型产品中褪黑素和维生素B₆含量的高效液相色谱分析方法，供试品的提取溶剂为含水溶液，提取方法为超声提取；流动相A为甲醇，流动相B为磷酸盐缓冲溶液，梯度洗脱，流动相A和流动相B梯度变化如下：起始比例为甲醇的体积含量10％，磷酸盐缓冲溶液体积含量90％；2-2.01min,甲醇的体积含量由10％变为50％，磷酸盐缓冲溶液体积含量由90％变为50％；2.01-8min，甲醇的体积含量保持为50％，磷酸盐缓冲溶液体积含量保持为50％；8-8.01min,甲醇的体积含量由50％变为10％，磷酸盐缓冲溶液体积含量由50％变为90％；8.01-13min,甲醇的体积含量保持为10％，磷酸盐缓冲溶液体积含量保持为90％。在本发明中，流速0.8～1.5ml/min，优选0.8-1.2ml/min。在本发明中，紫外检测波长设定为210～279nm，优选260～279nm。