[发明专利]一种杂交瘤细胞株、其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株、其制备方法和应用。所述杂交瘤细胞株的制备方法包括：以人SARS‑CoV‑2 S重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，之后取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，其后筛选出能够分泌新冠病毒表面S抗原单克隆抗体(简称“单抗”)的杂交瘤细胞。本发明还提供了利用所述杂交瘤细胞生产所述单抗的方法，所述单抗能够特异性结合新冠病毒表面S抗原，特异性强，效价高，有望实现新冠病毒的快速、敏感、准确、简便的检测，并能显著提高检测速度、检测灵敏度，大幅简化检测程序，而无需复杂漫长的PCR扩增过程和设备，尤其适合大量临床样本的快速筛查和即时检测，且所述单抗的制备方法产量高、稳定性好，生产成本低。

技术领域

本发明具体涉及一种杂交瘤细胞株、其制备方法和应用，例如其在生产新冠病毒表面刺突糖蛋白S单克隆抗体中的用途，属于生物技术领域。

背景技术

新冠病毒属于传染性很强的RNA病毒，目前，病毒感染已经全球化，成为世界范围内高度重视的公共健康问题。为了更加有效的对新冠病毒感染进行控制，必须对新冠病毒进行快速、准确、有效的诊断。

目前常用的新冠病毒检测方法有核酸检测法和抗体检测法等。核酸检测法的优点是操作简便，快速，缺陷在于：核酸检测咽拭子采样有采集不到的风险，必要时需要重复采样；早期感染患者、咽喉部病毒滴度低的患者无法适用，容易假阴性；采样的工作人员容易暴露，风险大；需要增加提取核酸的操作，不熟练的技术人员容易提取失败造成假阴性，或者与他人的样本发生污染，造成假阳性。在疫情发生的早期，核酸检测法是唯一的选择。但是由于核酸法的局限性，只能将疑似患者和密切接触者进行隔离，而无法对他们进行直接检测(患病早期核酸法检测假阴性极高)。抗体检测方法的优点是灵敏度高，结果可靠，但抗体主要存在于体液循环系统中，取样和样本处理较繁琐，检测有滞后性，需要免疫细胞呈递抗原产生抗体，中间的时间窗口是很多致命性病毒大展宏图的好时机。

抗原检测法因具有采样准确(血液样本，不存在采集失败)、对早期感染者也能检测、测试速度快(胶体金试纸十几分钟到ELISA约一个小时)、方便快捷，弹性大，灵敏度高等优点，也有望应用于新冠病毒检测。实施抗原检测法的前提是需要获得特异性强的抗体，这正是业界亟待解决的难题。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种杂交瘤细胞株、其制备方法和应用，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种杂交瘤细胞株的制备方法，其包括：以人SARS-CoV-2S重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠，之后取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，其后筛选出能够分泌新冠病毒表面S抗原单克隆抗体的阳性融合细胞，即为所述杂交瘤细胞。

在一些实施方式中，所述的制备方法具体包括：

以纯化的人SARS-CoV-2S重组蛋白为免疫原免疫8-12周龄BALB/c雌性小鼠，初次用弗氏完全佐剂与免疫原进行乳化，经皮下和腹腔多点免疫，剂量为100-150μg免疫原/只；隔两周加强免疫一次，共三次，佐剂为弗氏不完全佐剂，剂量为100-120μg免疫原/只/次；采用间接ELISA法检测小鼠尾血效价＞1∶104，融合前三天进行腹腔注射加强免疫100-120μg免疫原/只；

以及，取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按照3-5∶1的比例混合后，以1000-1200rpm的转速离心10-15min，之后以RPMI-1640培养基重悬细胞，再次以1000-1200rpm的转速离心10-15min，并将沉淀细胞松散均匀且于37℃预热，在60s内加入预热的PEG1500，然后缓慢滴加RPMI1640培养基，再次以1000-1200rpm的转速离心10-15min，其后以HAT培养基重悬细胞，并置于37℃，5％CO₂培养箱内培养。