[发明专利]基于CRISPR技术进行靶核酸检测的方法

权利要求书

1.一种非疾病的诊断目的的检测样品中靶核酸的方法，所述方法包括将样品与V型Cas蛋白(CRISPR/CAS效应蛋白)、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器接触，所述gRNA包括与所述V型Cas蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列；检测由V型Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸；所述单链核酸检测器选自单链DNA、单链RNA或单链DNA-RNA杂交体的任意一种或任意几种组合，所述单链核酸检测器不与所述gRNA杂交；

所述V型Cas蛋白为Cas12i和/或Cas12j；

所述Cas12i为SEQ ID NO：2所示的蛋白；

所述Cas12j为SEQ ID NO：4所示的蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，胶体相变，电化学检测和基于半导体的检测。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸为单链核酸和/或双链核酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述靶核酸为单链DNA和/或双链DNA。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述单链核酸检测器的5’端和3’端分别设置不同的报告基团，当所述单链核酸检测器被切割后，可以表现出可检测的报告信号；或者，所述单链核酸检测器的5’端和3’端分别设置不同的标记分子，通过胶体金检测的方式检测反应信号。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸来源于微生物、土壤、水源、动物、植物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述靶核酸来源于病毒、细菌、人体。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸为PCR、NASBA、RPA、SDA、LAMP、HAD、NEAR、MDA、RCA、LCR或RAM方法富集或扩增的产物。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸为病毒核酸、细菌核酸、与疾病相关的特异核酸或与对照有差异的特异核酸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述疾病相关的特异核酸为特定的突变位点或SNP位点；所述病毒为植物病毒或动物病毒。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述病毒为乳头瘤病毒，肝DNA病毒，疱疹病毒，腺病毒，痘病毒，细小病毒，冠状病毒。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述冠状病毒选自SARS、SARS-CoV2(COVID-19)、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1或Mers-Cov。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链核酸检测器还包括修饰；所述修饰选自碱基修饰，骨架修饰，糖修饰。

14.一种用于检测样品中靶核酸的系统或组合物或试剂盒，所述系统或组合物或试剂盒包括权利要求1-13任一权利要求中所述的V型Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器。

15.权利要求14所述的系统或组合物或试剂盒在制备检测样品中靶核酸的试剂中的应用。