[发明专利]一种抗凝血流苏子多糖及其提取分离方法和应用

说明书

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种抗凝血流苏子多糖，其提取分离方法是将流苏子经脱脂、除去小分子极性成分，水提醇沉获得粗多糖，然后将除蛋白、脱色后的精制多糖用DEAE‑52纤维素色谱柱、Sephadex G‑100凝胶色谱柱进一步纯化而得。本发明对该多糖的体外凝血效果进行考察，结果表明该多糖有良好的抗凝血作用，可用于制备抗凝血药物。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种抗凝血流苏子多糖及其提取分离方法、应用。

背景技术

流苏为木犀科 Oleaceae流苏树属Chionanthus植物，产于甘肃、陕西、山西、河北、河南以南至云南、四川、广东、福建、台湾。生长于海拔100-1450米处的山地或丘陵的林中或灌丛中。朝鲜、日本也有分布。目前对流苏的研究主要在栽培技术和园林绿化上，对于流苏的药用价值和化学成分研究主要集中在流苏花及其根皮部。化学成分主要含有黄酮类、木脂素、三萜类、甾醇类等成分。目前还未见对流苏子多糖的研究，其药理活性成分尚不明确。

凝血实质上是水溶性的纤维蛋白原转变为水不溶性的固态纤维蛋白的过程，是在内源性或（和）外源性凝血途径下产生凝血酶原激活物，在凝血因子的作用下产生凝血酶，最后在凝血酶的作用下使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。血浆凝血酶原时间（PT）主要反映的是外源性凝血途径中凝血因子I、II、V、VII、X的活性；部分活化凝血活酶时间（APTT）主要反映内源性凝血系统状况，与VIII、X、XI、XII等内源性凝血因子活性有关；凝血酶时间（TT）值是主要反映纤维蛋白原转变为纤维蛋白程度的重要指标；血浆纤维蛋白原（FIB）主要反映纤维蛋白原的含量。

血栓是严重危害公众健康的常见病与多发病，是脑卒中、冠心病、动脉粥样硬化等致残和致死率高的心脑血管疾病的主要病理学基础，严重危害着人类的健康，降低了患者及家属的生活质量，对社会发展、人类健康、经济等造成巨大的影响。抗凝血药可用于防治血管内栓塞或血栓形成的疾病，预防中风或其它血栓性疾病，是通过影响凝血过程中的某些凝血因子阻止凝血过程的药物。目前，迫切需要有效的抗凝血药物，提高病人的生活质量，减轻经济负担。

发明内容

本发明目的在于提供一种从流苏子中提取分离得到具有抗凝血作用的流苏子多糖，同时提供了该多糖的提取分离方法及应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种抗凝血流苏子多糖的提取分离方法，其包括以下步骤：

（1）流苏种子，粉碎，用石油醚浸泡脱脂，残渣挥干石油醚后，用乙醇浸泡提取，所得残渣挥发至无醇味；以纯水为提取溶剂进行加热提取，滤液减压浓缩，然后向浓缩液中加入无水乙醇，静置、离心，收集沉淀，沉淀复溶，冷冻干燥，获得流苏子粗多糖；

（2）流苏子粗多糖经Sevage法除蛋白、脱色，得到流苏子精制多糖；

（3）流苏子精制多糖用超纯水溶解、离心除不溶物后加入到DEAE-52纤维素色谱柱，依次用浓度0.00mol/L、0.05mol/L、0.15 mol/L、0.25mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱液采用苯酚-硫酸法检测，测定490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，浓缩，透析，冷冻干燥；其中，0.00 mol/LNaCl溶液的洗脱峰为组分CR-1；

（4）组分CR-1用超纯水溶解、离心除不溶物后加入到Sephadex G-100凝胶色谱柱，用超纯水洗脱，采用苯酚-硫酸法进行检测，测其在波长490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，得到1个单一主峰，浓缩、透析、冷冻干燥后的多糖命名为CRp-1；该CRp-1即为抗凝血流苏子多糖。