[发明专利]FRT细胞株及其在制备检测细胞内游离钙离子浓度的制剂或试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株及其在制备检测胞浆内钙离子浓度的制剂或试剂盒中的应用。本发明通过荧光淬灭动力学试验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂，应用Fura‑2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca²⁺浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系；Z'因子为0.75，说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株及其在制备检测细胞内游离钙离子浓度的制剂或试剂盒中的应用。

背景技术

P2Y受体(purinergic receptor P2Y，P2rys)是一类由胞外核苷酸活化的G蛋白偶联受体，目前已经从人体组织细胞中克隆了8个P2ry亚单位，P2ry1、P2ry2、P2ry4、P2ry6、P2ry11～14；其中P2ry2(purinergic receptor P2Y,G-protein coupled2，P2ry2)作为P2ry的一个重要亚型，日趋受到人们的重视。P2ry2广泛分布在脾、睾丸、肾、肺、心脏和大脑中，与诸多生理功能密切相关，如冠状动脉平滑肌收缩、慢性支气管炎、动脉粥样硬化、囊性纤维化和对癌症的治疗等。因此P2ry2的调节剂在疾病治疗中发挥重要作用，UTP作为P2ry2天然的激动剂可以介导小鼠冠状动脉收缩；地夸磷索(diquafosol)是P2ry2激动剂在治疗干眼病中的常用药物；激活P2ry2在治疗胃食管反流病、乳腺癌及心肌缺血等疾病方面也有潜在的作用。其拮抗剂可以治疗特发性肺纤维化；改善卵母细胞的发育能力；可抑制炎症反应等。P2ry2在许多病理条件下显示出可塑性，可能是治疗这些疾病的潜在靶标。由于P2Y受体亚型重叠表达，目前发现的激活剂和拮抗剂大多数作用于P2Y受体，缺少P2ry2高特异性、高亲和力的受体激动剂和拮抗剂。

近年来检测细胞内游离Ca²⁺浓度常用Fura-2等Ca²⁺指示剂，这种方法虽然相对简便，但荧光染料易累积在细胞的酸性细胞器中(称为隔室效应或分室效应)，不与胞浆内游离Ca²⁺结合，会导致测量上的误差。膜片钳技术与荧光测钙技术结合的光电联合检测技术可以解决以上问题，是运用多种方法多方面研究生物现象的典范，但是这种方法缺点是操作复杂且重复性差。

发明内容

有鉴于此，本发明构建了检测细胞内游离钙离子浓度的细胞筛选模型。该模型经济简便快捷高效。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了所述的FRT细胞株在检测细胞内游离钙离子浓度中的应用；

其中，相对荧光强度变化值/slope值/斜率值与细胞内Ca²⁺浓度呈现良好的正相关；

所述相对荧光强度变化值/slope值/斜率值计算如下：

0s～1.4s的相对荧光值的平均值。

本发明还提供了所述的FRT细胞株在制备检测细胞内游离钙离子浓度的制剂或试剂盒中的应用；

其中，相对荧光强度变化值/slope值/斜率值与细胞内Ca²⁺浓度呈现良好的正相关；

所述相对荧光强度变化值/slope值/斜率值计算如下：

0s～1.4s的相对荧光值的平均值。

本发明还提供了检测细胞内游离钙离子浓度的制剂或试剂盒，包括所述的FRT细胞株以及可接受的助剂；

其中，相对荧光强度变化值/slope值/斜率值与细胞内Ca²⁺浓度呈现良好的正相关；