[发明专利]基于破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法

权利要求书

1.一种基于破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法，其特征是基于破伤风人免疫球蛋白-金簇的荧光和免疫原性的双功能特性，一方面，金簇具有荧光特性，另一方面它能够与破伤风抗原结合，利用金簇在检测线与控制线荧光强度比值的变化，直接用于破伤风抗原的测定。

2.根据权利要求1所述的破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法，其特征是所使用的破伤风人免疫球蛋白-金簇采用破伤风人免疫球蛋白直接还原氯金酸的方法制备：将浓度为17.8~142 mg/mL 的破伤风人免疫球蛋白溶液和浓度为1.5~3.5mol/L的氢氧化钠溶液加入到浓度为0.5~7.5 mmol/L的氯金酸溶液中，混匀，置于25~60°C水浴恒温反应15~150分钟，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行透析纯化处理，得到破伤风人免疫球蛋白-金簇荧光材料水溶液。

3.根据权利要求1所述的破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法，其特征是所使用的破伤风人免疫球蛋白-金簇采用破伤风人免疫球蛋白直接还原氯金酸的方法制备：将浓度为2.5 moL/L的NaOH溶液与浓度为2.5 mmoL/L氯金酸依次加入到为59.3 mg/mL的人免疫球蛋白溶液中，混匀后置于37℃恒温水浴槽中孵育30分钟。

4.待反应结束后用分子量为3500的透析袋对反应液透析纯化处理，得到人免疫球蛋白-金簇荧光材料水溶液。

5.根据权利要求1-3任一所述的破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法，其特征是所使用的破伤风人免疫球蛋白-金簇荧光材料水溶液为浅色，紫外-可见光谱在280 nm处出现蛋白质的特征吸收峰，在紫外灯照射下产生强烈的红色荧光，最大激发波长和发射波长分别为351 nm和619 nm，量子产率为13%，荧光寿命为7.8 μs。

6.根据权利要求1所述的破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法，其特征是利用破伤风人免疫球蛋白-金簇在Chemiscope series 5600成像仪上检测线和控制线的荧光强度比值的变化值∆（T/C）判断破伤风抗原的含量，所使用的激发波长为365 nm。

7.根据权利要求5所述的一种破伤风人免疫球蛋白-金簇为荧光探针的破伤风抗原测定方法，其特征是所破伤风抗原测定的线性范围为0.4~6.0 μg/mL，最低检测限为0.03 μg/mL。