[发明专利]一种新型冠状病毒的病毒样本处理液和处理方法及检测病毒的快速恒温反转录扩增试剂盒在审
| 申请号: | 202011063391.3 | 申请日: | 2020-09-30 |
| 公开(公告)号: | CN112195274A | 公开(公告)日: | 2021-01-08 |
| 发明(设计)人: | 赵民清;李萌;方园;任云 | 申请(专利权)人: | 杭州缔园生物技术有限公司 |
| 主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6806;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 瞿晓晶 |
| 地址: | 311500 浙江省杭州*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 新型 冠状病毒 病毒 样本 处理 方法 检测 快速 恒温 转录 扩增 试剂盒 | ||
1.一种新型冠状病毒的病毒样本处理液,其特征在于,所述病毒样本处理液为终浓度为0.1~1M的盐酸胍水溶液或吐温-20的终质量百分含量为0.01%~0.1%的0.1×TE缓冲液。
2.一种基于权利要求1所述病毒样本处理液的新型冠状病毒的病毒样本的处理方法,包括以下步骤:
将新型冠状病毒的病毒样本和盐酸胍水溶液混合,使盐酸胍的终浓度为0.1~1M,振荡混匀10s,13000rpm离心1.5min,得到处理后待测样本;
或,
将新型冠状病毒的病毒样本与含吐温-20的0.1×TE缓冲液混合,使吐温-20的终浓度为质量百分含量为0.01%~0.1%,95℃处理10min,冷却,13000rpm离心1.5min,得到处理后待测样本。
3.一种基于权利要求1所述病毒样本处理液的检测新型冠状病毒的快速恒温反转录扩增试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括第一引物组和/或第二引物组、权利要求1所述病毒样本处理液、扩增反应液、阳性对照和阴性对照;
所述第一引物组包括能够扩增核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的靶基因的引物;
所述第二引物组包括能够扩增核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的靶基因的引物;
所述阳性对照包括含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示序列或含核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示序列的载体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述第一引物组包括核苷酸序列如SEQID NO.5~10所示的引物。
5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述第二引物组包括核苷酸序列如SEQID NO.11~16所示的引物。
6.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述扩增反应液包括WarmStart DNA聚合酶、WarmStart RTx反转录酶、pH指示剂、缓冲液和dNTP。
7.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照包括含核苷酸序列如SEQID NO.3所示序列或含核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示序列的载体。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述载体包括pUC-T载体。
9.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述阴性对照包括0.1×TE缓冲液。
10.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,每10μL快速恒温反转录扩增的反应体系包括:第一引物组和/或第二引物组共1μL、扩增反应液5μL、水2μL和阳性对照或阴性对照或用权利要求1所述病毒样本处理液处理后待测样本2μL。
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