[发明专利]一种制备烟酰胺单核苷酸的方法有效
| 申请号： | 202011061874.X | 申请日： | 2020-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN112159831B | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 陶荣盛;原犇犇;朱傅赟;郑云;沈正权;孙梁栋;潘震华;沈青;胡海亮;刘萍 | 申请（专利权）人： | 湖州颐盛生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 313000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 烟酰胺单 核苷酸 方法 | ||
1.一种制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
以次黄苷酸和/或鸟苷酸、ATP、烟酰胺为原料，用核苷酶、核糖磷酸焦磷酸激酶和烟酰胺磷酸核糖转移酶进行联合催化反应，并在反应体系中还添加有选自下组中的一种以上酶：嘌呤氧化酶、过氧化氢酶、无机焦磷酸酶，得到烟酰胺单核苷酸，其中反应体系pH为7.0-8.0。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，原料中使用次黄苷酸或者次黄苷酸与鸟苷酸的混合物。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述次黄苷酸和鸟苷酸是指次黄苷酸和鸟苷酸或者它们的钠盐。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在反应体系中同时添加有嘌呤氧化酶、过氧化氢酶和无机焦磷酸酶。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述嘌呤氧化酶是黄嘌呤氧化酶。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酶是AMP核苷酶或者IMP核苷酶。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酶氨基酸序列NCBI登录号为WP_012699601.1；核糖磷酸焦磷酸激酶氨基酸序列NCBI登录号为BAA05286突变体N120S或者BAA 05286突变体L135I；烟酰胺磷酸核糖转移酶氨基酸序列NCBI登录号为AAR87771、NP_717588或者WP_115638626；嘌呤氧化酶三个亚基的核苷酸序列NCBI登录号为947116、947205和945148；无机焦磷酸酶氨基酸序列NCBI登录号为Q58025。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所用的酶呈游离酶、固定化酶或者其表达微生物菌体形式。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述微生物为大肠杆菌。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述微生物为大肠杆菌BL21（DE3）。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，核苷酶的表达基因的核苷酸序列为SEQ IDNO: 1；核糖磷酸焦磷酸激酶的表达基因的核苷酸序列为SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3或者SEQ ID NO: 4；烟酰胺磷酸核糖转移酶的表达基因的核苷酸序列为SEQ ID NO: 5、SEQ IDNO: 6或者SEQ ID NO: 7；嘌呤氧化酶的表达基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:8 ；无机焦磷酸酶的表达基因的核苷酸序列为SEQ ID NO: 9。
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，反应温度为20-40℃。
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