[发明专利]COVID-19 IgG/IgM检测试剂盒、检测卡、稀土纳米探针及制备方法

说明书

本发明公开了COVID‑19 IgG/IgM检测试剂盒、检测卡、稀土纳米探针及制备方法其中，稀土纳米探针为核壳结构镨掺杂氟化钆镥包覆氟化钇钠，粒径为40nm～60nm，其组成为：NaGdxLu1‑y‑xF4:yPr@NaYF4，其中，NaGdxLu1‑xF4为基质，掺杂离子为Pr3+；冒号“:”表示为镨掺杂；x和y为稀土离子掺杂摩尔百分数，x的范围为20％～90％，y的范围为1％～10％；NaYF4为壳层，@表示NaYF4包覆在NaGdxLu1‑y‑xF4:yPr表面。本发明的纳米探针为稀土氟化物纳米材料具有背景低，发光寿命长，荧光信号强，信噪比高等优势，标记通过共价键将探针与新冠重组抗原连接，标记产物稳定，具有灵敏度高、准确度高、检测快速简便等特点，可对早期新冠疑似患者进行筛查检测，能够快速特异地帮助临床确诊。

技术领域

本发明涉及COVID-19 IgG/IgM检测试剂盒及其微球及制备与检测方法。

背景技术

新型冠状病毒基于目前的流行病学调查，潜伏期一般为3-7天，最长不超过14天。感染者以发热、乏力、干咳为主要表现。鼻塞、流涕等上呼吸道症状少见。约半数患者多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。值得注意的是重症、危重症患者病程中可为中低热，甚至无明显发热。

新型冠状病毒也称严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒-2，已明确为β属冠状病毒，是感染人类冠状病毒家族中第7个成员，与2003年的SARS冠状病毒一样，由RNA核酸和蛋白等组成，RNA很容易降解，蛋白衣壳将RNA包裹在其中，加上一层由脂质和糖蛋白组成的包膜外衣，从而使其RNA得到保护，病毒RNA编码四种主要结构蛋白，包括刺突糖蛋白(S，SpikeProtein)、小包膜糖蛋白(E，Envelope Protein)和膜糖蛋白(M，Membrane Protein)，及核衣壳(N)蛋白，其中S蛋白对于病毒识别与入侵有着关键的作用。病毒通过S-蛋白与人ACE2互作的分子机制，来感染人的呼吸道上皮细胞，病毒进入人体后，主要通过激活免疫系统，通过细胞因子、炎症因子等导致肺损伤。并且利用宿主细胞进行复制增殖。因此可以通过采集人的特定部位细胞样本，检测其中是否含有病毒RNA核酸，来确认机体是否受到感染。

核酸检测是目前新型冠状病毒感染确诊的“金标准”，然而病毒核酸检测存在检测时间和周期长、环境要求高、技术力量要求高、硬件设备要求高、价格昂贵等一系列问题，只能在省/市级疾控中心和较大规模的三甲医院开展，不利于肺炎患者的快速诊断和筛查，不利于疫情的防控。

血清学诊断应用中以样本中的IgM测定和IgG测定为常见。新型冠状病毒IgM/IgG抗体检测试剂，主要检测的免疫球蛋白为新型冠状病毒特异性IgG和IgM。在新型冠状病毒感染的初次体液免疫应答中(原发性感染)，特异性IgM抗体首先出现，但存在时间较短，通常为数周到数月。新型冠状病毒特异性IgM抗体阳性常提示早期感染，可用于感染急性期的辅助判断。新型冠状病毒IgG抗体，在免疫接种后、原发性感染及再次感染时都可检出，且较长时间存在。

在感染过程中特异性抗体对抗原亲合力随感染时间的延长而不断升高，检测IgG抗体亲合力，能够较准确地判断感染时间，可作为新型冠状病毒抗体检测的一种补充，高IgG抗体亲合力可辅助排除近期原发性感染。

若能在家庭或者社区，就能便捷、快速、低成本的对新型冠状毒感染患者进行筛查，就能够高效的隔离被感染人群、阻断传播途径，将病毒感染的防控端口前移，能够推进新型冠状病毒感染的有效和及时防控。抗体检测对临床实验室的操作要求相对于核酸检测要低，可以快速、大量检测，且可以在基层实验室完成，可采用IgM和IgG同时检测，两个结果相互补充印证，提高整体准确性并有助于判断病程进展。稀土纳米免疫荧光法是将新型冠状病毒重组抗原共价结合于稀土纳米探针表面活性基团上，通过激发后检测线是否产生荧光来判断结果，快速便捷可准确定量同时具有高灵敏度、标记物稳定等优点，对早期疑似患者进行筛查检测，能够快速特异地帮助临床确诊。