[发明专利]根癌农杆菌的微滴数字PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及根癌农杆菌检测技术领域，具体涉及根癌农杆菌的微滴数字PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用。本发明提供根癌农杆菌的微滴数字PCR检测引物探针组，其包括序列如SEQ ID NO.2‑3所示的引物对和序列如SEQ ID NO.4所示的探针。本发明根据根癌农杆菌Ti质粒上的VirD2基因序列设计特异性引物和荧光探针，该引物和探针具有较高的特异性，扩增的线性相关良好，灵敏度高，可应用于实际植物样本的定量检测，准确性高，为植物冠瘿病的早期发现、预防和治疗提供高效的绝对定量检测方法，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及根癌农杆菌检测技术领域，具体涉及根癌农杆菌的微滴数字PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用。

背景技术

根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)是一种植物病原细菌，属于革兰氏阴性菌，寄主范围广泛，包括绝大多数的双子叶植物和少数的单子叶植物。根癌农杆菌侵染可引起植物的冠瘿病，严重时导致植物死亡(Pacurar,D.I.；Thordal-Christensen H.；Pacurar M.L.；Pamfil, D.；Botez,C.；Bellini,C.；Agrobacterium tumefaciens:Fromcrown gall tumors to genetic transformation.Physiological and Molecular PlantPathology.2011,76(2),76-81)。

根癌农杆菌含有一个200-250kb的Ti质粒，在侵染致病过程中起到决定性的作用(Gordon,Jay E.；Christie,Peter J.The Agrobacterium Ti Plasmids.MicrobiolSpectr.2014,2(6),1-29)。Ti质粒上的一段 T-DNA序列所携带的致瘤相关基因可以被任何外源基因所替代转入到宿主细胞中，因此根癌农杆菌作为植物转基因的重要工具菌被广泛应用(McCullen,Colleen A.；Binns,Andrew N.Agrobacterium tumefaciens and PlantCell Interactions and Activities Required for Interkingdom MacromolecularTransfer.Annual Review of Cell and Developmental Biology.2006,22,101-127)。