[发明专利]一种秸秆降解菌及分离筛选方法

说明书

本发明提供了一种秸秆降解菌及分离筛选方法，属于生物技术领域，本发明中以木质素为靶标对多年秸秆还田土壤中的微生物进行筛选，获得木质素降解单菌，并结合纤维素降解单菌的筛选；将筛选出的秸秆降解效率高的纤维素降解菌和木质素降解菌组成菌群，获得降解效率高的菌群，将菌株混合发酵制成菌剂在田间试验筛选出降解效率高的组合。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种秸秆降解菌及分离筛选方法。

背景技术

内蒙古自治区是我国重要的玉米产区，也是重要的玉米调出地区，同时每年也生产大量的玉米秸秆。目前国家政策禁止露天焚烧秸秆，并且鼓励秸秆的综合利用。在秸秆利用的诸多方法中，秸秆还田具有改善土壤结构，提高土壤持水能力，达到保水保肥的效果。虽然秸秆还田能够培肥地力节省化肥的使用等方面的好处，但是受低温限制玉米秸秆还田之后的降解速率慢，大量未降解的秸秆在土壤中形成悬空。下茬春玉米播种时因悬空造成落干，导致出苗不齐从而降低产量。并且在播种之后随着秸秆的降解消耗氮肥，造成跟幼苗争夺氮肥的情况。

为了解决秸秆腐解慢的问题，大量研究集中在开发高效秸秆降解菌。目前市场上提供了丰富的玉米秸秆降解菌菌剂，但是绝大多数仅适用于中高温条件。菌剂主要降解秸秆中的纤维素和半纤维素，而且菌株的筛选大多以对滤纸崩解的速度为参考。这种筛选策略获得的菌株大多在冷凉地区对玉米秸秆的降解效果不理想。秸秆的主要组成成分为纤维素、半纤维素和木质素。木质素虽然占的比例不高但是对秸秆的保护作用很强，要提高对秸秆的降解速率必须重视首先解除木质素对纤维素和半纤维素的保护作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种秸秆降解菌及分离筛选方法，该方法以木质素为靶标对多年秸秆还田土壤中的微生物进行筛选，获得木质素降解菌，并结合纤维素降解菌的筛选。将筛选出的纤维素降解菌和木质素降解菌组成菌群，通过秸秆降解率获得降解效率高的菌群，将菌株混合发酵制成菌剂在田间试验筛选出降解效率高的组合。

为实现上述目的，特采取如下技术方案：

一种秸秆降解菌，包括假单胞菌、不动杆菌；

所述假单胞菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年08月11日，分类命名：假单胞菌Pseudomonas sp.，保藏编号为CGMCC No.20521；

所述不动杆菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年08月11日，分类命名：不动杆菌Acinetobacter sp.，保藏编号为CGMCC No.20522。

一种如上所述的秸秆降解菌的分离筛选方法，包括如下步骤：

s1：秸秆降解菌样品的收集

分别制取玉米秸秆土壤稀释液、玉米秸秆菌落稀释液、玉米秸秆稀释液；

s2：利用木质素和纤维素为唯一碳源法进行筛选

利用木质素和羧甲基纤维素为唯一碳源制成平板，将上述样品的稀释液涂布平板；放置室温进行培养；

s3：将筛选出的菌落进行纯化

将上一步获得的单菌落接种到新鲜的LB培养基上进行划线培养获得单菌落，将单菌落进行发酵获得发酵液然后保存到甘油中进行低温保存菌种；

s4 低温条件下筛选秸秆降解率高的菌株

在15℃温度条件下，再将上述菌种进行接种到秸秆上，再根据秸秆表面结构变化和失重率筛选降解率最高的菌株；并在-80℃环境下保存菌株；

s5：测定高效秸秆降解菌菌株产生的木质纤维素酶酶活