[发明专利]与SARS-CoV-2 RBD结合的羊驼源纳米抗体

说明书

本公开涉及与SARS‑CoV‑2 RBD结合的羊驼源抗体或其抗原结合片段，具体涉及能以高亲和力结合新冠病毒(SARS‑CoV‑2)受体结合区域(RBD)的羊驼源纳米抗体或由其组成的双表位特异性抗体或其抗原结合片段，其能够用于预防、治疗和/或诊断SARS‑CoV‑2感染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于治疗和诊断用的抗SARS-CoV-2 RBD的纳米抗体序列。

背景技术

SARS-CoV-2属于冠状病毒，其导致的肺炎称为COVID-19。SARS-CoV-2通过其表面突刺蛋白(spike)的受体结合区域(RBD)与上皮细胞表面的血管紧张素转换酶2(ACE2)结合后进入细胞，完成侵染。

从康复患者体内分离的全人源抗体被证实具有很好的抗病毒作用，但这些都是传统的单克隆抗体，由2条重链和2条轻链组成。具有分子量大，生产工艺复杂，不易加工改造等局限性。

在骆驼科动物体内存在一种天然缺失轻链的抗体，即重链抗体，其可变区仅由重链组成，该可变区简写为VHH，该可变区蛋白直径小于10纳米，因此又被称为纳米抗体。纳米抗体具有分子量小、穿透性强、易于表达、易于基因改造以及易于结合多个表位等优点。

目前尚无抗SARS-CoV-2 RBD的羊驼源天然纳米抗体获批用于治疗COVID19。

发明内容

本公开提供了能以高亲和力结合新冠病毒(SARS-CoV-2)受体结合区域(RBD)的羊驼源重链抗体可变区序列(VHH)，该可变区序列又称为纳米抗体，其能够用于预防、治疗和/或诊断SARS-CoV-2感染。

发明人采用体外重组表达的SARS-CoV-2 RBD蛋白对2头小羊驼进行3次免疫，然后分离出外周血淋巴细胞并抽提细胞的总RNA，随后反转录为cDNA。再以此cDNA为模板，用特异引物扩增出纳米抗体序列。我们分离获得7株纳米抗体。分别命名为aRBD-2、aRBD-3、aRBD-5、aRBD-7、aRBD-41、aRBD-42和aRBD-54，其氨基酸序列分别如下：

aRBD-2的氨基酸序列：

QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTYTMGWFRQAPGKEREFVAAMRWSDTDYADSLKGRFTISRDNANNAMYLQMNSLGPEDTAVYYCAAGEAWLARSTHHYDYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：22)

aRBD-3的氨基酸序列：

QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVSCISHPGGSTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAASPLALFRLCVLPSPLPYDYWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：23)

aRBD-5的氨基酸序列：

QVQLVESGGGLVQPGGTLRLSCAASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVSCISGSGGITNYTDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAPVSHTVVAGCAFEAWTDFGSWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：24)

aRBD-7的氨基酸序列：