[发明专利]一种表观遗传修饰核酸文库的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 202011031593.X | 申请日： | 2020-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN112111562A | 公开（公告）日： | 2020-12-22 |
| 发明（设计）人： | 陈世兴;宋世平;李铁;王跃林 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;贾允 |
| 地址： | 200050 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表观 遗传 修饰 核酸 文库 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
提供模板核酸，对所述模板核酸进行PCR扩增，得到含有磷酸修饰的PCR扩增产物；
采用核酸外切酶对所述PCR扩增产物进行切割，消化掉含有磷酸修饰的一条链，得到无修饰的单链DNA；
对所述单链DNA进行互补配对，然后在预设位点修饰表观修饰分子，得到修饰产物；
将所述修饰产物中的短链延伸补齐，得到表观修饰核酸链。
2.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述PCR扩增采用两个引物，其中一个引物为5端磷酸修饰的引物，另一引物为不含任何修饰的引物，所述不含任何修饰的引物不会被所述核酸外切酶切割。
3.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述核酸外切酶为Lambda核酸外切酶或T7核酸外切酶。
4.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，对所述单链DNA进行互补配对，然后在预设位点修饰表观修饰分子，得到修饰产物，具体包括：
提供一条与所述单链DNA互补的延伸引物，退火后组成部分双链部分单链的结合物，利用聚合酶、含有表观修饰分子和dNTP的混合物，在预设位点添加上表观修饰分子。
5.根据权利要求4所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述聚合酶为Vent DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶中的任意一种。
6.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述预设位点为互补配对后的双链DNA的任意位点。
7.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述预设位点为限制性内切酶的切割位点。
8.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述表观修饰分子为羟甲基胞嘧啶、甲基胞嘧啶、醛甲基胞嘧啶、羧甲基胞嘧啶和甲基腺嘌呤中的任意一种。
9.根据权利要求1所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法，其特征在于，所述模板核酸来源于病毒、细菌、真菌、植物和动物中的至少一种。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的表观遗传修饰核酸文库的构建方法的应用。
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