[发明专利]肿瘤特异性T细胞的检测方法

说明书

本发明公开了肿瘤特异性T细胞的检测方法，收集肿瘤细胞或者肿瘤组织的全细胞组分后，采用游离全细胞组分或者将全细胞裂解物组分负载于纳米/微米粒子后与外周免疫细胞共孵育，在癌症特异性T细胞被激活后检测肿瘤特异性T细胞的特异性分子即可确定外周血等外周组织中癌症特异性T细胞的含量。本发明全细胞裂解物组分为水溶性成分和非水溶性成分，为游离状态或者负载于纳米粒子或微米粒子，负载方式为全细胞的水溶性成分和非水溶性成分分别或同时被包载于粒子内部，和/或分别或同时负载于粒子表面；检测方法为流式细胞术、酶联免疫斑点技术、酶联免疫吸附技术、胶体金免疫层析法、基因检测技术等。

技术领域

本发明属于免疫治疗和免疫检测领域，具体涉及一种基于全细胞的肿瘤特异性T细胞的检测方法。

背景技术

近些年来免疫技术的发展极其迅速，尤其是癌症的免疫治疗领域。随着对癌症认识的不断提高，人们发现人体的免疫系统和各类免疫细胞在抑制癌症发生、发展的过程中扮演着关键角色。最近几年PD-1抗体和CAR-T等疗法相继获批进入临床，其临床效果良好，但是癌症疫苗和PD-1抗体等癌症免疫治疗只对一部分患者有效。如何能在用药前或用药时判断免疫治疗药物是否有效以及患者预后就显得非常关键。

现有技术公开了一种能有效用于肿瘤特异性T细胞含量检测的检测颗粒、其相应的制备方法、包括其的试剂盒以及利用其进行肿瘤特异性T细胞含量检测的检测方法，在基于待测样品中的被激活的肿瘤特异性T细胞所分泌的细胞分泌物、被激活的肿瘤特异性T细胞的增殖状态或被激活的肿瘤特异性T细胞的细胞表面标志物中的任意一种或多种而进行该肿瘤特异性T细胞的含量的检测中用于激活肿瘤特异性T细胞。免疫疗法依托免疫系统被癌症特异性/相关性抗原激活的T细胞杀灭肿瘤细胞，因而病人体内癌症特异性T细胞的含量与免疫疗法的疗效密切相关。但是目前缺乏有效的手段全面准确地检测患者外周血中的癌症特异性T细胞含量。

发明内容

本发明提供一种检测外周组织中肿瘤特异性T细胞及其含量的方法，可以为癌症患者预后提供参考信息；肿瘤特异性T细胞与肿瘤细胞、肿瘤组织全细胞、肿瘤细胞裂解物组分、肿瘤组织全细胞裂解物组分或者负载裂解物组分的微纳粒子共孵育后被激活并分泌或表达一些特异性分子，通过检测所分泌或表达的这些特异性分子即可测定肿瘤细胞特异性T细胞的含量，其中关键技术在于T细胞的激活。

本发明采用如下技术方案：

肿瘤特异性T细胞的检测方法，包括以下步骤，将激活物与外周免疫细胞孵育，然后检测肿瘤特异性T细胞的特异性分子，实现肿瘤特异性T细胞的检测。

肿瘤特异性T细胞含量的检测方法，包括以下步骤，将激活物与外周免疫细胞孵育，然后检测肿瘤特异性T细胞的特异性分子；再根据肿瘤特异性T细胞的数量与外周免疫细胞的数量比例得到肿瘤特异性T细胞的含量。

本发明中，激活物包括肿瘤细胞、肿瘤组织全细胞、肿瘤细胞裂解物组分、肿瘤组织全细胞裂解物组分，还可以包括免疫佐剂，其中肿瘤细胞裂解物组分、肿瘤组织全细胞裂解物组分中的裂解物组分可以为水溶性裂解物组分，也可以为非水溶性裂解物组分，优选水溶性裂解物组分与非水溶性裂解物组分。

本发明中，激活物可以为游离细胞或者游离裂解物组分，也可以为负载于微纳粒子上的裂解物组分；优选游离裂解物组分或者负载于微纳粒子上的裂解物组分；裂解物被负载于微纳粒子内部和/或表面。裂解物组分负载于微纳粒子内部和/或表面的方式包括但不限于非共价键吸附、静电相互作用、疏水相互作用、氢键相互作用、共价键等。本发明可以同时使用负载水溶性组分的微纳粒子和负载非水溶性组分的微纳粒子，也可以使用同时负载有水溶性和非水溶性组分的微纳粒子，或者使用只负载水溶性组分的微纳粒子，或者使用只负载非水溶性组分的微纳粒子。

本发明中，孵育的条件为细胞可以生存的条件，如4℃～60℃，优选37℃；孵育的时间为1～100小时，比如5～70小时，优选10～50小时。