[发明专利]利用UPC2-PDA-Q-Tof/MS快速同时测定枸杞子酒中35种有效成分的方法

权利要求书

1.利用UPC2-PDA-Q-Tof/MS快速同时测定枸杞子酒中35种有效成分的方法，其特征在于：

首先将待测酒样冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜，经UPC2 BEH柱进行梯度洗脱分离，同时采集UPC2-PDA模式及MS模式数据，ESI正负离子模式下分别监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，通过MS模式标准曲线线性回归方程对各有效成分进行定量；

包括如下步骤：

步骤1：前处理

将枸杞子待测酒样冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜；

步骤2：标准品的配制

分别配制1g/L的β-胡萝卜素、α-胡萝卜素、豆甾醇、硬脂酸、山楂酸、油酸、亚油酸、胡萝卜苷、棕榈酸、芹菜素、木犀草素、山奈酚、槲皮素、阿托品、L-天仙子胺、肉桂酸、乙酸东莨菪素酯、杨梅素、阿魏酸、对羟基肉桂酸、二氢阿魏酸、咖啡酸、烟酰胺、原儿茶酸、烟酸、氯化锦葵色素、矮牵牛素、芦丁、甜菜碱、核黄素、矢车菊-3-O-葡萄糖苷、飞燕草素葡萄糖苷、莨菪亭、矢车菊-3-O-2G-葡萄糖芸香糖苷的标准溶液，溶剂为甲酸-水-甲醇溶液，将35种枸杞子有效成分的标准溶液混合并逐级稀释，获得不同浓度的混合标准品溶液；

步骤3：标准谱图与标准曲线的绘制

将步骤2配制的混合标准品溶液进行色谱洗脱分离，利用PDA和MS模式进行采集，获得35种枸杞子有效成分标准品的标准谱图，以每种有效成分的峰面积为纵坐标，该标准品的浓度为横坐标，获得相应的标准曲线及线性回归方程；

步骤4：待测样品的检测

将经步骤1前处理后的待测酒样经UPC2 BEH柱进行梯度洗脱分离，同时采集UPC2-PDA模式及MS模式数据，ESI正负离子模式下分别监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，利用保留时间和分子量进行定性，通过标准曲线线性回归方程进行定量；

所述甲酸-水-甲醇混合溶液中，甲酸的浓度为0.4％，甲醇的浓度为94.6％，V/V，余量为水；

色谱条件设置如下：

色谱柱：ACQUITY UPC2，BEH，2.1×50mm，1.7μm；

进样量：2μL；

柱温：55℃流动相：流动相A CO₂，流动相B甲酸-水-甲醇混合溶液，流速：1.5mL/min；梯度洗脱程序为：初始条件为2％的流动相B，流动相B在2min内增加至50％，达到50％后保持1.5min，然后0.1min内流动相B返回到2％，重新平衡系统3.0min；整个循环时间为10.0min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于检测条件设置如下：

PDA检测器波长：360nm；540nm；

MS模式；

ESI+电离模式条件：毛细管电压：3.0kV；取样锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气体流速：1000L/H；参比质量：亮氨酸脑啡呔[M+H]⁺＝556.2766；

ESI-电离模式条件：毛细管电压：2.5kV；取样锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气体流速：1000L/H；参比质量：亮氨酸脑啡呔[M-H]^-＝554.2615；采集范围：m/z 50～1200。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤4中，为了确保定性的准确性，可通过TIC窗口提取PDA检测数据，利用PDA检测的保留时间、ESI检测的保留时间及分子量三个参考值，对比标准品和样品，以此确保定性的准确性。