[发明专利]一种抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体及应用

说明书

本发明公开了一种抗SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白的单克隆抗体及应用。所述单克隆抗体包括轻链和重链，其特征在于，轻链的可变区CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为RASENIYSSLA、VATDLA和QHFWGTPWT；重链的可变区CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别为TDHYII、EIYPGNGHTYYNERFKG和SRYYGPFAYWG。本发明抗SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白的单克隆抗体为IgG1亚型，抗体的亲和力可达5.28×10^‑11，免疫能力强，具有稳定性好，活性高、亲和力强等优点，检测特异性强、灵敏度高、准确性好，可以用于全自动免疫分析仪的试剂盒中，也应用于免疫层析试纸条检测SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白，能够有效推动SARS‑CoV‑2检测的推广与应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体及应用。

背景技术

新型冠状病毒肺炎是由严重急性呼吸系统综合症2型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起的新型呼吸系统疾病。SARS-CoV-2是第七种能够感染人类具有包膜的正链RNA病毒。SARS-CoV-2的基因组学鉴定表明它是一种双核病毒，与蝙蝠冠状病毒RaTG13的同源性为96%，但不同于SARS-CoV。SARS-CoV-2有与SARS-CoV相似的受体结合域（RBD）结构。SARS-CoV-2功能性的开放阅读框（ORF）包括ORF1a和ORF1b，主要的结构蛋白包括刺突蛋白（S）、膜蛋白（M）、包膜蛋白（E）和核衣壳蛋白（N）。根据已有的研究，M和E蛋白为病毒组装所必须。S蛋白与病毒黏附宿主细胞相关，其中S蛋白的RBD结构介导了与血管紧张素酶2的相互作用。S蛋白定位在病毒颗粒的表面，并具有高度的免疫原性。N蛋白病毒的主要结构之一，与病毒RNA的转录和复制有关，其功能为包装病毒的基因组形成病毒粒子和干扰细胞的循环过程。在许多冠状病毒中，包括SARS-CoV，N蛋白都具有很高的免疫原性并在感染期间被大量表达。因此S蛋白和N蛋白是COVID-19血清学诊断潜在的抗原。

目前，COIVD-19的诊断主要通过实时定量PCR（RT-PCR）检测病毒的RNA。研究显示SARS-CoV-2主要感染下呼吸道，通过鼻咽拭纸和支气管的样本检测。然而下呼吸道样本的采集需要专门的装置和专业的技术人员。既往研究表明，RT-PCR确诊患者的痰液样本的阳性率为74.4%-88.9%；鼻拭纸样本额阳性率为53.6%-73.3%；发病后大于8天的咽拭纸检测阳性率极低。由于病毒主要感染位置在下呼吸道，采集的不同呼吸道样本引起了很高的阴性率。因此，迫切需要一种准确、高效的检测方法对有疑似症状的患者进行评估。

公开号为CN111187354A的发明公开了一种胶体金捕获法检测SARS-CoV-2抗体的检测试纸，包括底板、样品垫、结合垫、包被膜和吸收垫，沿待测液体样本流动方向，样品垫、结合垫、包被膜和吸收垫依次固定于底板上；结合垫负载有金标蛋白，金标蛋白包括nCOVAg01；包被膜设有检测区和质控区，检测区负载有鼠抗人IgM/IgG抗体，质控区负载有羊抗兔多抗；nCOVAg01包括所述的重组抗原。

公开号为CN111426844A的发明公开了一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 IgG-IgM抗体联检的荧光免疫层析试纸条，该试纸条包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次首尾衔接粘贴在底板上，结合垫上包被有SARS-CoV-2结构蛋白-标记物和羊抗兔IgG-标记物，硝酸纤维素膜上设有包被鼠抗人IgG单克隆抗体的检测线T1、包被鼠抗人IgM单克隆抗体的检测线T2和包被兔IgG的质控线C。

上述两篇现有技术中均是用于检测人血清中是否含有抗SARS-CoV-2的抗体，而体内抗体水平可能是由于之前感染过SARS-CoV-2，所以，无法用于作为实时的诊断方式。